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甘油二酯（Diacylglycerol, DAG）是近年来推出的一种健康功能性油脂，具有明确的预防肥胖的功效，可广泛应用于食品、医药及化妆品等领域。目前DAG的酶法制备多采用Sn-1,3位选择性脂肪酶催化，产物中有甘油三酯（Triacylglycerol, TAG）存在，导致DAG产品纯度较低。获取高纯度DAG产品是研究其生物医学和营养特性的基础。本研究以偏甘油酯脂肪酶Lipase G50和单甘油酯脂肪酶lipase CBD-MGLP为催化剂，建立了全酶法制备高纯度DAG产品的新工艺，并对DAG产品的性质进行了初步研究。主要研究结果如下：1.采用底物特异性较强（即对TAG无催化活性）的偏甘油酯脂肪酶Lipase G50催化甘油和游离脂肪酸（Free fatty acid, FFA）酯化合成DAG。较优的酯化条件为：反应温度35°C，甘油与脂肪酸摩尔比4:1，初始加水量为底物总重的2%。2.在优化的酯化条件下进行酯化反应的放大实验，得到酯化产物组成为：49.9%DAG，31.6%MAG，18.5%FFA。产物中无TAG生成。利用实验室发酵制备的单甘油酯脂肪酶lipase CBD-MGLP（水解酶活为5000U/g）催化水解酯化产物中的MAG，以初步纯化DAG。较优的水解条件为：加酶量375U/g，反应温度45°C，酯化产物与缓冲液质量比10:10，缓冲液pH9.0，在此条件下进行水解反应的放大实验，得到水解产物组成为：49.0%DAG,1.9%MAG，49.1%FFA。然后利用分子蒸馏对水解产物中的DAG进行进一步纯化，仅需130°C的蒸馏温度就能获得纯度为98.0%的DAG产品。而直接采用分子蒸馏对酯化产物中的甘油二酯进行纯化，需要170°C的蒸馏温度才能获得纯度为99.28%的DAG产品，且DAG产品的回收率（93.2%）和得率（46.5%）均低于酶法降解结合分子蒸馏中DAG产品的回收率（98.4%）和得率（48.2%）。3.对全酶法制备的DAG产品进行理化指标的评价，发现其符合国家相关标准；对DAG产品进行DSC分析，发现DAG产品的结晶曲线和熔化曲线均不同于原料TAG的结晶曲线和熔化曲线，DAG产品独特的结晶和熔化特性可以为其应用于人造奶油、搅打稀奶油等产品提供科学依据；考察了DAG产品的氧化稳定性及叔丁基对苯二酚(TBHQ)和维生素E(VE)对其氧化稳定性的影响，发现加入200ppmTBHQ可有效抑制DAG产品的氧化进程。本研究建立了全酶法制备高纯度DAG的生产工艺，在低温、低能耗、高效、环保的条件下获得了高纯度的DAG产品。该工艺有望用于制备高纯度的含功能性脂肪酸但耐热性差的DAG产品。