应用RACE技术克隆月见草△~6-脂肪酸脱氢酶基因cDNA

来源 :内蒙古大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:cgz1987
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多不饱和脂肪酸由于在人类健康中的重要作用而成为有价值的产品,目前市场上对γ-亚麻酸等多不饱和脂肪酸的需求持续增长,然而当前来源难以满足市场需求,寻找合适的替代来源将有助于解决这一问题。Δ~6-脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶。本实验根据其它植物中已知Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因保守区序列设计简并引物,以种子中富含高活性γ-亚麻酸的野生柳叶菜科植物月见草(Oenothera biennis)未成熟种子总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得大小为565bp的cDNA片段。再根据获得的序列设计基因特异性引物,通过3′RACE和5′RACE技术获得753bp和313bp的cDNA片段,将三段序列拼接得到1445bp的具有完整3′非编码区的cDNA序列,该序列所编码的氨基酸序列在GeneBank数据库中的BLAST进行相似性搜索,检索结果表明与ω-6途径的Δ~6-脂肪酸脱氢酶具有最大同源性。成功获得Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因1445bp cDNA片段为进一步克隆全长cDNA和下一步将Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在油料作物种子中特异表达,利用转基因油料作物作为多不饱和脂肪酸的生物反应器奠定基础。
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