猪瘟(classical swine fever,CSF)是由经典猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)引起的一种高度传染性和致命性的猪病毒性疾病。近几十年来，由于病毒和宿主因素的不同，猪瘟的流行一直在发生变化，呈现出各种各样的临床综合症，因此必须进行实验室检测和确认。目前，对猪瘟病毒的检测方法主要有病毒分离鉴定、ELISA、RT-PCR等，但这些方法都或多或少的存在一定的缺点。CSFV E2蛋白能够诱导机体产生抗体发挥免疫保护作用，抵抗病毒的入侵，因此E2蛋白不仅是研究疫苗的首选蛋白，也是鉴别诊断猪瘟病毒和进行血清学检测的重要蛋白。为了有效预防和控制猪瘟传播和流行，研制安全、高效的新型猪瘟疫苗对于猪瘟的防控具有重要意义。单克隆抗体具有较高的灵敏度和特异性，基于单克隆抗体建立的血清学检测方法，如胶体金试纸条等，操作简便，诊断结果科学可信，在临床诊断中得到广泛应用。
　　本研究旨在分析本实验室用杆状病毒表达的猪瘟E2蛋白的免疫原性，以E2蛋白为免疫原，筛选针对猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体。对杆状病毒表达的猪瘟E2蛋白进行纯化，获取较高纯度的E2蛋白，是进行免疫效果分析和筛选单克隆抗体的基础。将其与不同的佐剂混合乳化后免疫昆明实验小鼠，分别在第0d、28d免疫小鼠，每周采集小鼠血清并检测抗体水平和效价。结果显示，试验组均有特异性抗体产生，与阴性对照组相比存在明显差异;不同试验组之间的抗体水平也存在差异，E2+弗式佐剂+纳米佐剂组的免疫效果最好;免疫后的小鼠体内的抗体水平随着时间和免疫次数的增加不断上升，在第56天达到最高水平。说明本试验采用的杆状病毒表达的CSFV E2蛋白具有良好的活性和免疫原性。
　　CSFV单克隆抗体(MAb)，用于CSFV分离株的抗原比较，最终用于诊断分析，以便在猪瘟爆发和血清学监测期间进行快速检测和鉴别。成功纯化出高纯度的E2蛋白对单克隆抗体的制备具有重要意义。在证明本实验室表达的CSFV E2蛋白具有良好免疫原性的基础上，通过细胞融合以及多次亚克隆和IPMA筛选鉴定，最终筛选出了3株针对CSFV E2蛋白的单克隆抗体，分别是5D1，8H7，13B2。3株单克隆抗体的亚型均属于Ig G1型，轻链是κ链。将3株单克隆抗体杂交瘤细胞扩大培养后收集状态较好的细胞注射到BABL/c雌鼠体内，制备单克隆抗体腹水，鉴定结果显示3株单抗抗体IPMA效价分别为1∶32000、1∶64000、1∶128000，而且均能与CSFV E2蛋白和CSFV SM株发生反应，与PCV2、PRRVS无交叉反应。
　　综上所述，本研究在成功纯化出CSFV E2蛋白的基础上，证明本实验室表达的E2蛋白具有良好的免疫原性;并且以此为免疫原制备了3株CSFV E2蛋白的单克隆抗体。因此，本实验室表达的E2蛋白为进一步研究CSFV亚单位疫苗提供了一个良好的免疫原;制备的单克隆抗体是研究猪瘟病毒抗原快速检测技术的基础。