肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor，TNF)是1975年由Carswell等发现的一种具有抗肿瘤作用的细胞因子。随着研究的不断深入，对其本质有了充分的认识：该多肽细胞因子具有广泛的生物学活性，低水平时，参与机体的免疫防御；高水平时，会给机体造成严重损害。国外早在1985年就生产出了rhTNF，并于1989年应用到Ⅱ期临床试验，但由于rhTNF对肿瘤的治疗效果并不象人们所期望的那样，而且大剂量使用会引起许多毒副作用，故人们的注意力从将TNF用于肿瘤的治疗转移到如何降低某些疾病患者体内高水平的TNF。抗—TNF单克隆抗体就是用于达到此目的的一种TNF拮抗剂。 本研究旨在研制出针对rhTNF的单克隆抗体，利用该McAb建立ELISA检测法，并进行一些初步应用。 本研究采用Davis等创建的方法，在甲基纤维素半固体培养基上进行融合细胞的克隆化。主要步骤是：在常规免疫和细胞融合后，细胞接种在含甲基纤维素、IMDM和HAT等的半固体培养基上，5—7天后肉眼可见培养基中长出许多由杂交细胞形成的集落。将这些集落挑到含有DMEM、15％FCS和HAT的液体培养基内再培养，得到1824株克隆，经RIA筛选得到15株阳性克隆，对其中的5株进一步研究发现，它们的染色体众数均在96—105之间，均分泌IgG1类抗体，测得的亲和力分别为1.25×10~8l／mol，1.12×10~8l／mol，2.34×10~8l／mol，8.55×10~7l／mol，1.04×10~8l／mol。 接着进行抗体的配对试验，根据双抗夹心的原理建立ELISA检测法，该法具有较高的灵敏度，可测到10pg／ml的TNF水平，与G-CSF、GM-CSF两种细胞因子的交叉均＜0.01％。 最后将所制得的McAb和ELISA检测法进行初步应用。首先比较了用McAb治疗与否的细菌感染小鼠在24小时后的存活率，治疗组明显优于细菌组，经检测治疗组小鼠血中的TNF水平也低于细菌组，不同组小鼠的病理结果也显示出：虽然细菌组与治疗组有大致相同的病理改变，但程度不同，前者稍重；测定了正常人的