聚乙二醇(PEG)具有较好的生物相容性,广泛用在生物医药领域。通过PEG的活性端基与药物、蛋白或纳米药物载体等共价连接(聚乙二醇化),能够有效保护药物、降低免疫反应、延长体内循环时间,增强药物治疗效果。然而,PEG链长度、端基官能团数目及其PEG化的程度的准确表征对于生物医用非常重要,这一直是聚合物分离和表征领域的重大挑战。本文主要研究高效液相色谱(HPLC)对几类不同端基功能化PEG的分离和表征,并结合离线质谱对聚合物结构进行确证。第一章,介绍了功能化PEG在生物医药领域的应用和聚合物的分离表征方法,以及HPLC对聚合物进行分离表征的原理和研究进展。第二章,通过HPLC研究了PEG和氨基PEG在普通硅胶基反相柱上的保留情况。利用临界液相色谱条件(LCCC)根据PEG末端氨基官能团数目,通过离子交换机理实现了PEG和氨基PEG的分离,同时能够避免PEG分子量不同对分离的影响。在PEG的LCCC条件下,微调流动相(乙腈/水)中的盐浓度,获得苄胺和苯酚在含盐流动相中保留因子的比值(αA/P值),根据αA/P值可以预估硅胶基反相填料柱的离子交换容量。利用LCCC使用普通的硅胶基反相柱(C18柱和苯基柱),通过合适的离子交换容量采用等度洗脱实现了不受分子量影响的氨基功能化PEG的分离。第三章,在上一章中通过HPLC实现了PEG和氨基PEG的分离表征,为了进一步对其他不同端基功能化PEG进行分离和准确表征,在本章中对线性PEG和三臂PEG进行了端基改性。首先,参照文献的合成路线利用马来酰亚胺对线性PEG进行端基改性,获得了具有不同分子量、不同功能化程度的系列马来酰亚胺改性PEG。其次,通过4-羧基苯甲醛与线性PEG反应,获得了具有不同分子量、不同功能化程度的系列苯甲醛改性PEG。最后,利用马来酰亚胺和苯甲醛对多臂PEG (3-arm PEG)进行端基改性,制备了三臂马来酰亚胺PEG和苯甲醛PEG。通过1HNMR对产物进行初步表征,确定所得功能化PEG的结构,为后续HPLC分析提供具有不同功能化端基的系列PEG样品。第四章,利用PEG的HPLC临界条件研究了第三章中制备的马来酰亚胺改性PEG在反相填料柱上的分离情况。通过改变流动相中乙腈和水的比例,在反相C18硅胶柱上获得了未功能化PEG和双功能化马来酰亚胺PEG的临界色谱条件都是：水相中含有40%乙腈(25℃)。利用该LCCC根据PEG末端马来酰亚胺官能团的数目(分别含有零个、一个、两个、三个),实现了PEG和马来酰亚胺改性PEG的分离,避免了PEG分子量不同对分离的影响。不同功能化程度马来酰亚胺PEG的分离主要是通过末端马来酰亚胺官能团与柱子填料间的疏水相互作用实现的。结合离线基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),对马来酰亚胺PEG的重复单元结构和末端官能团结构进行了确证。LCCC对聚合物的分离表征,可为优化线性PEG端基的马来酰亚胺合成改性条件提供依据。总之本章采用等度洗脱通过非衍生化的方法,根据功能化程度实现了PEG和马来酰亚胺改性PEG的分离。在实际应用中需要准确表征苯甲醛改性PEG中非功能化PEG、单功能化PEG和双功能化PEG的分布。在第五章,我们利用第三章中制备的苯甲醛改性系列PEG分别通过HPLC和超高效液相色谱(UPLC),利用LCCC条件根据末端官能团数目实现了PEG和苯甲醛PEG的分离,并且能够避免PEG分子量不同对分离的影响。研究了流动相中有机溶剂所占比例、柱温和缓冲盐浓度变化对PEG和苯甲醛PEG保留的影响。分离主要是通过末端官能团苯甲醛和柱填料之间的疏水相互作用实现的。LCCC对聚合物的分离表征,可为优化线性PEG端基的苯甲醛改性合成条件提供依据。在本章中,我们通过等度洗脱根据PEG的功能化程度,首次实现了PEG和苯甲醛PEG的分离。