X线对结直肠癌细胞Kiss-1基因表达及其生物学特性影响的研究

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目的:1观察X线对体外培养肿瘤转移抑制基因Kiss-1高表达的人结直肠癌细胞中Kiss-1基因表达的影响,观测X线对其增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学特性的影响,探讨X线照射后Kiss-1基因表达对其生物学特性的意义;2检测X线对直肠癌组织中癌细胞Kiss-1基因表达的影响。方法:1通过免疫细胞化学法、Realtime-PCR法筛选出Kiss-1蛋白水平和mRNA水平表达均较高的结直肠癌细胞株,备用;2应用免疫细胞化学法检测0、2、4、6、8Gy等剂量X线照射后24h、48h结直肠癌SW480细胞Kiss-1蛋白的表达水平,应用SYBR GreenⅠ实时定量PCR系统检测、相对定量2-(△△Ct)法分析照射后24h、48h结直肠癌SW480细胞中Kiss-1mRNA的表达水平;3应用软琼脂集落形成实验法、流式细胞术Annexin V-PI法、Transwell小室侵袭和迁移实验检测不同剂量X线照射后24h、48h结直肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学特性的变化。4应用免疫组织化学SP法检测29例放射治疗前、后直肠癌组织中Kiss-1蛋白的表达,通过图像分析系统进行半定量分析。结果:1结直肠癌SW480细胞Kiss-1基因在mRNA水平、蛋白表达水平均高于结直肠癌细胞HCT-116和SW1116;2与0Gy组SW480细胞相比,照射后24h,2、4、6、8Gy组细胞Kiss-1基因mRNA水平无变化,2、4Gy组细胞Kiss-1蛋白表达不变,但6、8Gy组细胞Kiss-1蛋白表达上调;照射后48h,2、4、6Gy组细胞Kiss-1基因mRNA水平均上调,8Gy剂量组细胞Kiss-1基因mRNA水平不变,2、4Gy组细胞Kiss-1蛋白表达不变,但6、8Gy组细胞Kiss-1蛋白表达上调;3与0Gy组相比,照射后24h各剂量组细胞增殖能力无变化,48h后细胞增殖能力均降低;照射后24h各剂量组凋亡率无变化,照射后48h 4、6、8Gy剂量组细胞凋亡率均升高,2Gy剂量组凋亡率无改变;但照射后24h、48h, 4Gy、8Gy剂量组SW480细胞侵袭力和迁移力均增强;4盆腔常规DT50GY/25f/5周方案分割放疗前、后直肠癌组织中Kiss-1蛋白表达无变化(160.81±2.78 VS 158.04±3.24,P>0.05)。结论:1、适当调强X线照射剂量可上调结直肠癌细胞Kiss-1基因表达;2、X线照射抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡可能与上调Kiss-1基因表达有关;3、X线照射影响结直肠癌细胞侵袭、迁移能力可能与Kiss-1基因表达不相关。
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