冷冻前后脐带间充质干细胞对造血功能影响的实验研究

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目的:研究冷冻前后脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymalstromal cells hUC-MSCs)的生物学特性及其对造血干/祖细胞体外扩增的影响。方法:通过组织块培养法从脐带中分离获得hUC-MSCs,观察其生长形态,取传代培养至第3-6代,冷冻1、3月后复苏。分别收集冷冻前后第三代细胞⑴生长动力学特点;⑵流式检测免疫表型;⑶定向分化诱导成骨、成脂肪细胞;⑷研究其对造血干/祖细胞体外扩增的支持作用。A组:单纯骨髓单个核细胞(Bone marrow nuclear cellsBMNCs);B组:BMNCs加人包皮成纤维细胞;C组:BMNCs加骨髓间充质干细胞;D组: BMNCs加冷冻前、E组:BMNCs冷冻加后hUC-MSCs。分别于第0d,14d,28d,35d甲基纤维素法分析造血干/祖细胞集落的增殖状态及细胞因子SDF-1、SCF、TPO、IL-6,11的含量变化。结果:⑴冷冻前、后P3和P6收获细胞的拒染率分别>93.8%和>92.4%;脐带间质原代培养收获的细胞数不同,其生长生长动力学特点差别较大;⑵人脐带间质细胞具有间充质细胞部分特征;不同的是CD34为24.2%;内皮标记CD31为13.3%;⑶冷冻前后均可向成脂、成骨细胞分化;⑷不同时间点造血干/祖细胞集落数分析,C、D、E三组明显高于A、B两组(p<0.05),观察集落C、D、E三组具有典型的造血分类形态,随着体外长期培养天数的增加造血干/祖细胞集落数逐渐减少,而流式检测CD34+细胞的比例却逐渐升高。共培养35天后细胞因子SDF-1、IL-11变化与集落分析结果一致。结论:低温保存3个月内不影响细胞的存活率,冷冻前后hUC-MSCs均具有干细胞的“干性”、在体外可有效刺激较早期造血干/祖细胞扩增。
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