视黄醇结合蛋白的表达及其单抗在临床检测中的应用

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近年来,肾小管疾病在泌尿系统疾病中的发病率逐年升高,越来越受到人们的关注。据统计,20%-40%慢性肾功能衰竭患者是由肾小管疾病所致。肾小管损伤时,一些特异性标志蛋白会在尿液中排出。尿液中这些标志物的检测有助于肾小管疾病的早期诊断和治疗。视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Protein, RBP)是一类在人体内负责从肝脏转运视黄醇至各组织细胞的运载蛋白,对视黄醇生理功能的发挥起着重要作用。RBP主要在肝脏中合成。肝脏中分泌的RBP-视黄醇聚合物与转铁蛋白(Transthyretin,TTR)形成稳定的蛋白复合物在血液系统中循环。RBP-视黄醇-TTR复合体在视黄醇释放后解体,RBP以游离形式存在于血液系统中,游离的RBP在肾近曲小管被重新吸收和分解。当肾小管损伤时,尿液中RBP含量会有不同程度的上调。因此尿液中RBP的含量可作为诊断肾小管损伤的指标。目前RBP抗体均由天然蛋白免疫动物获得。人体中RBP含量甚微,此外RBP纯化繁琐、得率较低、成本较高。因此获得天然纯化的RBP非常困难。本研究采用原核表达的方法,在E.coli中表达并纯化RBP,制备了识别天然RBP的单抗S-59-1和S-59-2。经鉴定,两株单抗均识别170-201氨基酸范围的表位。通过尿RBP商业化试剂盒替换实验表明,这两株单抗均可用于包被或检测,为下一阶段自主试剂盒的研发创造了有利条件。
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