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研究背景肿瘤发生浸润和转移是复杂而有序的多阶段生物学过程,受多个基因的调控,许多研究发现肿瘤的基因组存在遗传不稳定性,容易发生微卫星不稳定(microsatellite instablility, MSI)和杂合性缺失(loss of heterozygosi ty, LOH)。Pinx1(Pin2/TRF1-interacting protein)是近年来在人及酵母细胞中发现的定位于染色体8p23这一位点的新端粒酶／端粒调控因子,这一位点处在多种肿瘤的高频杂合缺失区域,体外实验和体内裸鼠成瘤实验发现肿瘤细胞中PinX1或PinX1-TID的过表达能抑制端粒酶活性,使端粒缩短［17］。而内源性PinX1的缺失则可增加端粒酶活性并延长端粒,也可增加裸鼠的肿瘤发生。在肾癌、卵巢癌和肺癌等研究中发现,Pinx1在癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织,说明PinX1基因可能参与控制细胞增殖。将PinX1基因导入SMMC-7721肝癌细胞后发现该细胞的生长受到明显的抑制,说明PinX1基因对肝癌细胞的生长是有抑制作用的,但关于PinX1基因在肝癌中的表达和遗传不稳定性与肝癌临床病理关系的研究还鲜见报导,本文研究PinX1基因在肝癌中的LOH和MSI及PinX1蛋白的表达情况,分析其与肝癌临床病理特性之间的关系,为阐明PINX1基因如何影响肝癌发生发展及研究抑癌基因在肿瘤中的作用机制提供理论依据。研究目的研究Pinx1基因D8S277位点在肝癌中的微卫星不稳定(MSI)和杂合性缺失(LOH),以及这种遗传不稳定性在肝癌中对Pinx1蛋白表达的影响。阐明Pinx1基因遗传不稳定性以及Pinx1蛋白表达变化与肝癌发生、发展的关系,揭示Pinx1基因在肝癌中作为抑癌基因是怎样影响肝癌发生发展,为研究抑癌基因在肿瘤中的作用机制提供理论依据。研究方法(1) Pinx1蛋白的表达采用Envision免疫组织化学染色的方法进行检测。(2)Pinx1蛋白表达检测后采用Image-pro Plus计算机图像分析软件进行分析。(3)石蜡包埋的肝癌组织DNA基因提取,采用苯酚-氯仿抽提法。(4) Pinx1基因D8S277位点的DNA基因提取后采用PCR-单链构象多态性(SSCP)方法进行扩增,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳及常规银染检测MSI及LOH。(5)采用SPSS软件对数据进行相关性统计分析。研究结果1)肝癌Pinx1基因微卫星D8S277位点LOH的检出率为35.71%(10/28),与肿瘤的分化程度有无淋巴结转移、有无包膜浸润及分期之间均不具有差异(P>0.05)。2)MSI的检出率为10.71%(3/28),与肿瘤的分化程度有无淋巴结转移、有无包膜浸润及分期之间均不具有差异(P>0.05)。3)Pinx1阳性蛋白在癌周正常组织高表达,在肿瘤组织中低表达或不表达,Pinxl阳性蛋白在肝癌患者肿瘤组织中的检出率为32.14%(9/28),与肝癌患者的有无淋巴结转移、肿瘤的分化程度及分期之间不具有相关性(P>0.05),但与肿瘤包膜浸润之间具有相关性(P<0.05)4)Pinxl蛋白表达与微卫星D8S277位点的LOH及MSI之间不具有相关性(P>0.05)。结论在肝癌组织中存在Pinxl蛋白表达的下降,Pinx1蛋白的表达与肿瘤包膜浸润之间具有相关性,是抑制肿瘤发展的影响因素, Pinx1基因微卫星D8S277位点的MSI及LOH,与Pinxl蛋白表达及肝癌相关病理特性之间未见相关性,可能不是影响Pinx1蛋白表达及肝癌发生发展的主要机制,可能还存在其他影响机制。Pinx1可能在抑制肝癌发生、发展中起到一定的重要作用。