胰岛素抵抗是指胰岛素作用的靶器官对胰岛素作用的敏感性下降,即正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态,主要发生的组织有脂肪组织、肝组织和骨骼肌组织。发生胰岛素抵抗时,骨骼肌细胞糖吸收作用降低；肝细胞中糖原合成量下降,肝糖的输出量增加；脂肪细胞对胰岛素的敏感性下降进而增加了存储的甘油三酯的水解作用及胰岛素的分泌。甘油三酯的水解作用促使循环系统中自由脂肪酸的浓度。肥胖引起的低烈度慢性炎症是引起机体胰岛素抵抗及相关代谢综合征的主要病理生理基础之一。来源于脂肪组织的自由脂肪酸与肥胖引起的胰岛素密切相关。本研究中,我们以两种脂肪组织重要组成细胞,即脂肪细胞与巨噬细胞为材料,运用不接触共培养方式,研究自由脂肪酸对脂肪组织胰岛素抵抗的作用。我们用自由脂肪酸孵育RAW264.7巨噬细胞,然后将其与3T3-L1成熟脂肪细胞共培养,结果发现自由脂肪酸能够通过增加巨噬细胞分泌TNF-α而削弱脂肪细胞对胰岛素的敏感性,进而加剧其胰岛素抵抗作用。Illumina公司的Solexa测序技术是目前世界上一种被广泛采用的新一代边合成边测序技术,这种技术利用其专利核心技术"DNA簇”和“可逆性末端终结”,达成自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序,具有高准确性,高通量和高灵敏度等突出优势。这项技术技术被广泛应用于多个方面的研究,包括全基因组的测序,转录组的分析,小RNA的表达谱及发现,甲基化表达谱和基因与蛋白的相互作用研究。MicroRNA (miRNA)是一类来源于“发夹”结构前体、非编码的小分子单链RNA,长约22个核苷酸。miRNA通过与靶基因mRNA分子的互补配对,使目标mRNA分子的翻译受到抑制或特异性的引起对mRNA分子的切割,从而在转录后水平对靶基因的表达进行调控。研究表明,miRNAs参与了许多重要生物过程的调控,包括细胞分化、增殖、凋亡和炎症反应等等。要了解miRNA在基因调控中扮演的角色,很关键的一个方法就是迅速、准确地定量检测miRNA基因在各种生理病理状态下的表达。本研究中,我们利用Solexa测序技术对小鼠各组织、人与动物血清miRNAs的表达谱进行了序列分析,结果发现在人、动物组织与血清中不仅存在内源性动物miRNAs,而且存在外源性单链植物miRNAs, Q-PCR及Northern blotting技术也验证了这一结论。