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目的 探讨ERCC1、TYMS、RRM1、TUBB3、NonmuscleMyosinⅡ、Myoglobin、MyoD1在恶性胸腔积液的肺腺癌中的表达的分子生物学意义以及确定对以铂类为基础的联合化疗的晚期患者的预后价值。 材料与方法 1、临床样本 收集2011到2012年中国医科大学附属第一医院门诊及病房胸腔积液，优选以癌细胞为主炎症细胞较少的，未接受过治疗的116例肺腺癌患者恶性胸腔积液作为研究对象，经细胞病理诊断及组织水平核实和免疫化学染色诊断为肺腺癌，另20例炎性胸水作为良性对照。6例肺腺癌穿刺样本。这116例中男47例，，女69例，年龄从26至87岁，平均年龄为57岁，并对50例患者进行了随访调查，生存期自确诊日至死亡时间或2013年4月末，中位随访时间为18个月(15-28个月)，其中48均接受以铂类为基础的联合化疗，2例失访。 2、液基细胞薄层检测技术（ThinPrepCytologyTest，TCT） 收集新鲜胸水25ml左右，室温下2000r/min离心5分钟，弃去上清液，加入清洗液再次离心后，弃去上清液，取底层沉淀细胞与保存液混合后，机器Thinprep5000自动制片，并进行染色和镜下诊断。 采用TCT常规制片，诊断后，每份标本收集新鲜胸水200ml左右，室温下2000r/min离心5分钟，经95％乙醇固定12小时后石蜡包埋，切片，HE染色后，镜下观察，筛选切片。肺穿刺组织标本经固定，石蜡包埋并制成切片。 3、免疫细胞化学染色检测 采用链霉素抗生物素-过氧化酶（streptavidin-peroxidase，SP）法，PBS缓冲液代替一抗作为空白对照，DAB显色，苏木素复染。常规脱水透明，中性树胶封片。CK7、TTF-1、vimentin一抗采自美国SantaCruz公司，ERCC1、TYMS、RRM1、TUBB3、NonmuscleMyosinⅡA、Myoglobin、MyoD1一抗采自美国abcam公司。 免疫化学染色结果判定:阳性染色为细胞浆或细胞核有棕黄色颗粒，切片中观察5个高倍镜视野(200×)，计算5个视野的阳性细胞的平均百分数，阳性染色细胞＜5％为阴性，≥5％为阳性。 4、免疫荧光染色 石蜡包埋切片，经脱蜡，脱苯和水化后高温高压抗原修复，加一抗，4℃过夜，PBS洗三遍，每次5分钟，加入二抗室温避光孵育2h。PBS洗四遍，每次五分钟。加入0.5μg/mlDAPI(PBS配制)染色10分钟，用PBS洗三遍，去除多余的DAPI。抗衰减荧光封片剂封片，显微镜观察，照相。 5、Western-Blotting检测 对恶性胸腔积液进行收集，放到-70℃冰箱冻存，良性胸水用于做阴性对照。总蛋白从收集的胸水细胞中提取，用Brodford法测定蛋白浓度，蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳后，转印至PVDF膜，5％脱脂奶粉封闭液封闭2h，一抗(1∶500)4℃过夜，后用TTBS洗膜，二抗室温孵育2小时，TTBS洗膜，Thermo试剂盒发光。以β-actin为内参，用凝胶成像及分析系统(BiolmagingSystems，美国)分析蛋白各条带的灰度值。所用抗体与免疫化学染色所用的抗体自同一公司。 6、统计分析 统计数据分析采用SPSS17.0统计软件，基因表达与临床特征之间的关系采用chi-squaretest或者Fishersexacttest。不同基因间蛋白表达水平相关性采用Spearmancorrelationcoefficients.TheKaplan-Meiermethod和Log-ranktest用于分析患者生存期与基因表达的关系。MultivariateCoxregressionanalysis用于分析年龄，性别与生存期的关系。P＜0.05具有统计学意义。 结果 在116例恶性胸腔积液中ERCC1的表达率为37％，TYMS的表达率为36.2％，RRM1的表达率为82.7％，TUBB3的表达率为69.8％。50例中NonmuscleMyosinⅡ的表达率为48％，Myoglobin的表达率为40％，MyoD1的表达率为38％。6例肺穿刺样本MyoD1免疫组织化学染色均为阴性。MyoD1的细胞免疫荧光染色定位核阳性。七种基因之间的表达具有良好的相关性。具有各基因阳性表达的患者其生存期短于阴性表达的患者。 结论 ERCC1、TYMS、RRM1、TUBB3、NonmuscleMyosinⅡ、Myoglobin、MyoD1的表达能够影响采用以铂类为基础的联合化疗为治疗方案患者的生存期，并且有助于更好的理解晚期肺腺癌细胞的恶性生物学行为，耐药相关蛋白表达的检测有助于对以铂类为基础的联合化疗的预后提供参考和预测价值。