酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S1相关蛋白的研究

来源 :福建医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guozhi1988
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目的:利用酵母双杂合体系筛选乙型肝炎病毒前S1(preS1)蛋白相关蛋白,以利于探讨前S1蛋白在乙型肝炎病毒的入胞机制。 方法:以HBVDNA阳性血清为模板通过PCR法扩增含EcoRI与PstI酶切位点的pres1基因序列,pAS2-1载体及pres1基因PCR产物经双酶切并连接,转化到大肠杆菌JM105,对重组质粒pAS2-1-pres1进行序列测定。乙酸锂转化法将重组质粒转化入酵母菌AH109,以Western Blot法证实重组质粒在酵母细胞中的表达。将pAS2-1-pres1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞,通过选择性培养、LacZ活性测定筛选阳性菌落,分离实验及交合实验排除假阳性,PCR扩增阳性克隆的目的基因并进行序列测定,结果提交NCBI的BLAST应用程序,在GeneBank数据库查询其同源序列。 结果:重组质粒pAS2-1-pres1经序列测定含有完整的pres1基因片段,Western Blot证实转化的酵母细胞能正确表达完整的pres1-BD融合蛋白,pAS2-1-pres1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,在5×10~6转化子中,经选择性培养共长出97个菌落,17个为LacZ阳性菌落,分离实验及交合试验筛选出1个阳性菌落,PCR扩增产物经GenBank数据库查询与人类初期多肽相关复合体a亚单位(Homo sapiensnascent-polypeptide-associated complex alpha polypeptide NACA)同源。 结论:成功构建了 pASZ刁个 真核表达载体,并通过酵母双杂合体系筛选体内与 presl相互作用的蛋白 NACA。
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