青霉素发酵液中生物表面活性剂的分离和鉴定

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青霉素是世界上产量最大,也是最早应用于临床的抗生素。目前,在工业生产中采用微生物发酵法生产青霉素,其中的提取和纯化工艺则采用溶媒萃取法。溶媒萃取法存在着弊端——微生物在生成青霉素的同时会代谢共生大量的生物表面活性物质,这些表面活性物质存在于青霉素发酵液中,使提取过程出现乳化现象,给分离操作带来困难,降低了分离速度,延长了提炼时间,增加了抗生素损失,影响萃取收率和产品质量。本论文采用超滤技术(Ultrafiltration,简称UF)去除青霉素发酵液中的生物表面活性物质,从而彻底解决了溶媒萃取过程中一直未能很好解决的乳化问题;同时,运用超滤技术将发酵液中的生物表面活性物质富集、浓缩,再结合冷冻干燥等手段回收,从而得到一种生物表面活性剂。实验结果表明截留分子量(MWCO)为10 kD的超滤膜能有效分离料液中起乳化剂作用的生物表面活性物质,消除青霉素提炼过程中的乳化现象;从青霉素发酵液中提取出的生物表面活性剂经实验分析证明是一种分子量在60-70 kD左右的糖蛋白,1 L发酵液中的含量为2.659g,其中蛋白质基团占糖蛋白质量的17.51 %,糖基占82.41 %。本文还研究了温度和压力对超滤膜性能的影响,探讨了超滤膜膜污染机理,并用不同方法和在不同操作温度下清洗超滤膜,最终确定了超滤膜在本实验中的最佳清洗方案:在35℃下,用纯水正向负压清洗+纯水反向负压清洗+0.4 %NaOH溶液清洗,然后用纯水清洗至中性。
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