苜蓿中华根瘤菌LysR家族转录因子LsrB调节基因转录的分子机制研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:UltraSparc
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
LysR家族调节蛋白是一类广泛存在于α-朊细菌各属中的转录调控因子。它参与调节细菌的新陈代谢、细胞分裂、群体感应、毒力、运动性、固氮和抗氧化反应等生命活动。苜蓿中华根瘤菌Rm1021共有98个LysR家族转录因子基因,研究组前期通过插入突变筛选到一个影响紫花苜蓿结瘤固氮的关键基因lsrB。为排除插入突变体可能存在极性效应,我们成功构建了苜蓿中华根瘤菌lsrB缺失突变体,通过研究发现,LsrB不但参与脂多糖的生物合成的调节,还影响与宿主植物的共生固氮能力。将lsrB缺失突变体接种宿主植物发现,lsrB缺失突变体与插入突变体具有相同的共生表型,它能诱导紫花苜蓿形成无效根瘤;突变体根瘤中出现类菌体分化异常,共生体膜分离以及类菌体降解等根瘤衰老的特征。lsrB突变导致根瘤菌细胞处于内源氧化状态,而且在lsrB缺失突变体诱导的根瘤中积累了大量的活性氧簇基团(ROS)。这些结果表明,LsrB可能是根瘤菌中的新的氧化感受调节蛋白。  许多氧化胁迫感受蛋白(如OxyR)主要通过半胱氨酸巯基的氧化还原来感受环境中的氧化信号,从而调节下游基因的表达。对lsrB基因的同源性分析发现,该基因存在于所有的根瘤菌和一些植物(动物)病原细菌中,其编码蛋白的底物结合结构域上存在较为保守的半胱氨酸残基。因此,我们推测LsrB可能通过半胱氨酸残基(Cys)的氧化和还原,改变自身构象,从而调节下游基因表达。为验证该假设,我们以苜蓿中华根瘤菌Rm1021为研究材料,将LsrB上的3个Cys残基(C146、C238和C275)分别置换为Ser,获得了苜蓿中华根瘤菌lsrB单点突变体(C146S、C238S和C275S)、两点突变体(C146/238S、C146/275S和C238/C275S)和三点突变体3m,然后进行遗传表型分析。将这些lsrB定点突变体接种紫花苜蓿,四周后观察发现,接种3m的植株显示缺氮症状(矮小、发黄),与接种lsrB缺失突变体的植株相似。而接种单点突变体,两点突变体的植株从外观上看与接种野生型根瘤菌的植物相似,但生物量明显减少。该结果表明,LsrB在共生固氮过程中的调节作用主要是通过蛋白质上的Cys残基来实现的。重要的是,lsrB缺失突变体和三点突变体3m对氧化剂非常敏感。lsrB和其下游基因lrp3以及与氧化胁迫反应相关的基因(如katA和gshA)均受氧化剂诱导表达,但Cys突变显著降低了氧化剂对相关基因的诱导表达水平。该结果表明,LsrB蛋白上的三个Cys残基是其诱导下游基因表达所必须的,其中C238是主要的调节位点。  在氧化条件下,LsrB蛋白上的两个Cys残基可能被氧化形成分子间二硫键,从而形成二聚体和多聚体。免疫沉淀实验进一步表明,LsrB是以二聚体的形式存在苜蓿中华根瘤菌中,而三点突变蛋白则难以形成二聚体。凝胶阻滞(EMSA)实验表明,氧化条件可以促进LsrB与lrp3启动子上的TN11A模体(motif)结合,而LsrB半胱氨酸残基突变蛋白则与含有该位点的DNA片段组成性结合。最后,转录组数据(RNA-seq)揭示,LsrB是一个全局性的转录调节因子,参与根瘤菌的许多生理代谢活动。综合现有的研究结果,我们确定LsrB是根瘤菌在共生条件下感受氧化胁迫的关键调节蛋白,它是共生体系稳定存在的必需分子开关。
其他文献
在电路板生产过程中,普遍采用电镀的方法实现各种孔的金属化。对于密度较低的单面板,采用常用的直流电源即可满足要求;对于密度较高的多面板,常规的电镀电源存在加工时间长、
负荷的持续增长、电力系统的老龄化、矿物能源危机、环境污染以及用户对优质电能的需求已成为全世界电力发展必须面临的重大难题。微网的出现为解决这些问题带来了新的契机,同
变频器以其优良特性在现代工业中应用越来越广泛,然而由于功率半导体器件以高频开关模式运行,也带来了不能忽视的电磁干扰问题。开关管高频的开通和关断会在变频器输出侧产生
随着课程改革的推进与发展,现阶段我国中学信息教学也发生了一定的变化,在教育教学期间,教师不仅要让学生获取相关的信息技术知识,还要积极对学生的学习思维进行培养,信息技
学位
该文研究了在秦岭南坡一个大熊猫的主要栖息地-陕西省长青国家级自然保护区内植物群落中的物种多样性.在海拔1400-2400m范围内设立20个样方(10×20m),分层调查了群落中的种子
糖尿病是一类胰岛素分泌绝对或相对不足而导致全身性代谢紊乱的综合症。在糖尿病的发病过程中,胰岛β细胞的数量减少以及功能缺失影响到胰岛素合成和分泌。糖尿病患者的主要临
花粉管快速生长对于显花植物的有性生殖至关重要。在之前的研究中,我们发现番茄柱头特异蛋白LeSTIG1作为花粉类受体激酶LePRK2胞外域的互作蛋白,能够促进体外花粉管的生长。但
散打专项限选课是高校武术与民族传统体育专业分项培养学生的主干课程之一.学生确定选择散打专项限选课也就意味着在大学一年级之后要进行紧接着的2年的这种课程学习.通过学