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目的:随着医药技术的发展,直接抗病毒药物得到了开发应用,丙型肝炎的治疗得到了改善,但是控制疾病传播最有效的方式仍然是研发出针对性疫苗。HCV疫苗的研发一直在进行,但是到目前为止仍没有一个有效的HCV疫苗研制出来。本文旨在以流感病毒为载体嵌合HCV E1基因构建和拯救候选疫苗株,并对其进行免疫评价。 方法:以流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,利用反向遗传学技术将HCV结构蛋白E1基因插入到PR8流感病毒非结构蛋白NS基因中,构建重组质粒rNS-E1,鉴定成功后将重组质粒rNS-E1与PR8流感病毒另外7个质粒(分别为PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M)共同转染进COSⅠ和MDCK细胞中,拯救以流感病毒为载体嵌合HCV E1基因的候选疫苗株,通过血凝试验(HA)、RT-PCR、PCR、Western blotting(WB)、透射电镜等方法对重组病毒FLU-HCV进行鉴定。将重组病毒rFLU-HCV/E1在9日龄SPF鸡胚上进行扩增、超滤浓缩、30%-60%蔗糖密度梯度纯化,得到重组病毒液。设置104TCID50、105TCID50、106TCID50三个剂量组,并设PBS对照组,按20μL/只滴鼻免疫BALB/c雌鼠,分0d、14d免疫两次,0d、14d和28d收集小鼠血清和脾淋巴细胞悬液,初步评价其免疫效果。 结果:成功拯救HCV疫苗候选株rFLU-HCV/E1,血凝初检效价(HA)为29-10,每1mL rFLU-HCV/E1病毒液含有1×106.5TCID50单位,其抗原蛋白含量为1.6mg/mL。滴鼻免疫Balb/c小鼠二免后14d取小鼠血清及脾淋巴细胞,测得针对重组病毒rFLU-HCV/E1的血凝抑制(HI)效价均值分别为80、640和1280,疫苗株在小鼠体内能产生针对PR8流感病毒的体液免疫,产生针对E1多肽表位的细胞免疫,与PBS对照组相比差异明显(p<0.001),且106TCID50组免疫效果优于104TCID50剂量组和105TCID50剂量组,初步证明重组病毒rHCV/FLU在Balb/c小鼠体内能产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答。 结论:以上实验表明rFLU-HCV/E1疫苗株能够刺激小鼠机体产生较好的体液免疫和细胞免疫,HCV E1基因片段在重组病毒中能够发挥抗原的免疫效应,这为新型HCV疫苗的研制提供新的研究策略。