论文部分内容阅读
拟南芥镁螯合酶H亚基(CHLH/ABAR)是植物激素脱落酸(ABA)潜在的胞质内受体,它通过拮抗一组WRKY转录因子(WRKY40、WRKY18、WRKY60)正向调节ABA信号转导。本论文通过酵母双杂交技术筛选到拟南芥叶绿体共伴侣蛋白(co-chaperonin)CPN20能够与ABAR相互作用。遗传学及生理学实验显示CPN20是ABA信号转导中的负调节因子,而叶绿体中另外两个共伴侣蛋白CPN10(1)、CPN10(2)以及叶绿体伴侣蛋白(chaperonin)CPN60均不参与ABA信号转导。这表明,CPN20在ABA信号转导中的负调控作用独立于共伴侣蛋白的功能。随后,本论文对CPN20如何参与ABAR-WRKY40介导的ABA信号通路进行了研究。结果表明,CPN20表达量降低抑制cch突变体及ABAR-RNAi转基因株系对ABA的脱敏表型;ABAR过表达不能恢复cpn20突变体ABA超敏表型;同时,CPN20过量表达不能恢复cch对ABA不敏感表型。这表明CPN20在ABA信号转导过程中可能作用于ABAR下游或与ABAR位于同一节点。而CPN20过表达不能恢复wrky40对ABA超敏表型,表明其在ABA信号转导中作用于WRKY40上游。分子及生化实验表明,WRKY40基因在cpn20突变体中表达水平降低;相反,WRKY40基因在CPN20过表达株系和cch突变体中表达量升高;ABA抑制WRKY40表达的效应在cch突变体中丢失,但是在cch cpn20双突变体中ABA对WRKY40基因表达的抑制作用增强。这表明CPN20可能通过拮抗ABAR正向调节WRKY40的表达水平进而参与ABA信号转导。此外,CPN20能够竞争性结合ABAR从而减弱WRKY40与ABAR的相互作用;ABA能够减弱CPN20与ABAR的相互作用,表明CPN20还可能通过拮抗ABAR-WRKY40相互作用参与ABA信号转导。本论文证明CPN20负调节ABA信号转导,并可能通过ABAR-CPN20-未知因子-WRKY40或者CPN20-ABAR-未知因子-WRKY40两条信号通路发挥作用,这也为了解共伴侣蛋白在植物适应逆境反应过程中的调控机制提供了新的研究思路。