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Orexin是1998年在下丘脑外侧区(LHA)发现的一种具有调节采食和能量平衡作用的神经肽，具有促进动物采食的功能。本研究旨在利用Orexin对动物的促采食功能，通过基因工程和分子生物学试验技术，构建pPICZaA-Orexin A酵母表达质粒，并研究该表达质粒在毕赤酵母中的诱导条件及表达，为下一步工作的展开，即pPICZaA-Orexin A在毕赤酵母中的诱导表达产物对猪促生长效应的研究做前期理论探讨。
本研究首先构建了重组酵母表达质粒pPICZaA-Orexin A，然后，用电击转化法将重组表达质粒转化入毕赤酵母X-33，并进行初步诱导表达及表达产物的Western-Blotting检测。最后通过更换不同诱导表达条件，找到可以在毕赤酵母中表达Orexin A的诱导条件。
研究结果表明：(1)人工合成的带有酶切位点的OrexinA片段序列正确，通过Xho I、Xba I双酶切连接到酵母表达质粒pPICZaA载体的多克隆位点上，重组质粒经PCR和测序鉴定表明构建成功且序列正确。(2)找到可以在毕赤酵母中表达OrexinA的诱导条件：选取Mut+表型高抗性重组子，用BMGY(pH6.0)培养基于锥形瓶中30℃、2、250rpm过夜培养至OD600=4，离心收集菌体后重悬于BMMY(pH6.0)培养基中至OD600=1，在锥形瓶中30℃、250rpm震荡培养。每24h添加100％甲醇至终浓度0.5％，培养时间为96h。(3)Mut+表型高抗性重组子经BMGY培养基(含甘油)激活培养后用BMMY培养基(含甲醇)重悬菌体，甲醇诱导表达5天后，取少量上清液进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析，可见一条分子量约3.5KDa清晰蛋白条带，与理论值相符，而空载体转化宿主菌的对照未发现特异的蛋白条带。同时，表达产物的Western-Blotting分析显示在3.5KDa处出现了一条特异的显色条带，表明表达产物是OrexinA。