环境水中植物病毒的检测及鉴定

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环境水(河流、湖泊、灌溉水、海水、自来水等)中致病性病毒的存在严重威胁着人类健康和农业生产。在环境水中已被证实存在有众多的植物病毒,这些水源的植物病毒有可能进入病害循环,从而导致植物病毒病害的传播和扩散。本研究主要检测环境水中的植物病毒,通过浓缩分离方法,建立环境水中植物病毒检测与鉴定的技术体系,同时测试环境水中植物病毒分离物对寄主植物的侵染性。主要结果如下:1.对山东、河北、内蒙古和黑龙江地区采集的65份水样品浓缩提纯后,利用4对属引物和15对特异性引物进行检测。其中,山东地区从泰安、济南、烟台、滨州、淄博、威海、聊城、济宁、德州和潍坊10个地区采样,共检测到黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄花叶病毒(Cucumber mosaic virus,ToMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)、番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)和番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)7种病毒;内蒙古自治区呼和浩特市和黑龙江省鸡西市检测到CGMMV;河北省廊坊市检测到PMMoV。其中CGMMV的检出率最高,达38.0%。2.在65份水样品中,6份水样品均能同时检测到CGMMV、TMV、ToMV和TYLCV4种病毒;5份水样品均能同时检测到TMV和CGMMV;3份水样品均能同时检测到ToCV和CGMMV。而在山东济南地区检出病毒种类相对比较丰富,共检测到CGMMV、ToCV、TMV、ToMV和TYLCV 5种病毒;其次是山东寿光地区,共检测到CGMMV、TMV、CMV和PMMoV 4种病毒。在检出的植物病毒种类中,RNA病毒居多,DNA病毒只检出TYLCV。3.TMV、ToMV和CGMMV,为烟草花叶病毒属(Tobamovirus)成员,都能通过汁液摩擦传播。通过对水样品进行浓缩提纯,使病毒粒子达到一定浓度和数量后,将含TMV、ToMV和CGMMV的病毒粒子接种在供试寄主上,TMV、ToMV和CGMMV接种植株症状明显,通过RT-PCR检测,结果显示:环境水中TMV、ToMV和CGMMV的分离物对寄主植物具有侵染性。4.将得到的污水检测(TMV-X1-3、ToMV-X1-3、CGMMV-BS-14)分离物进行一致性比对并构建系统发育树分析,结果显示:TMV-X1-3分离物与中国分离物Bei Cang Zhu(KU198186)一致性最高,达99.4%,亲缘关系最近;ToMV-X1-3分离物与中国新疆分离物XJT-1(FN985165)一致性最高,达100%,亲缘关系最近;CGMMV-BS-14分离物与中国台湾分离物BG-SB(FJ654657)一致性最高,达100%,亲缘关系最近。
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