论文部分内容阅读
背景肝癌是一种常见并严重危害人类生命健康的恶性肿瘤,中国情况尤为严重。肝癌发生与炎症密切相关,是典型的炎症相关性肿瘤,肿瘤微环境与肝癌发生、发展有密切联系。研究表明肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)是炎性细胞的主要成分,与肿瘤的生长、侵袭、转移等多种生物学行为相关。DNAX活化蛋白12(DNAX-activating protein 12 kD,DAP12)是表达在骨髓来源细胞系(Bone marrow-derived cells BMDCs)膜表面的糖蛋白分子,其通过结合DAP12相关性受体如髓样细胞激发受体(TREM-1、TREM-2)、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素15(Siglecs-15)等衔接胞内免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM)信号通路,在巨噬细胞免疫病原体清除、免疫抑制、巨噬细胞极化、分泌多种促肿瘤细胞因子等方面参与发挥多种生物学效应,与肿瘤的发生、发展存在密切关系。DAP12在肝癌的表达情况及其表达与肝癌临床资料及预后的相关性尚无报道。因此我们设计了一系列研究方法,初步研究DAP12在肝癌中的表达情况及规律,并通过统计学方法阐述分析DAP12在肝癌中的表达与临床指标间的关系,探讨DAP12在HCC中的表达规律及其临床意义。目的研究DAP12在肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况并分析其与患者临床病理特征及预后的关系,初步明确DAP12在HCC中的表达规律及其临床意义。方法第一部分首先通过肝癌组织的连续石蜡切片免疫组化,冰冻切片免疫荧光检查方法,明确同一HCC标本DAP12阳性表达细胞与CD163阳性表达细胞的关系,判断DAP12染色阳性细胞与CD163阳性细胞(代表替代活化型巨噬细胞)在肝癌组织内的位置关系。随后扩大样本量,采用组织芯片免疫组化染色,分析肝癌及癌旁组织中DAP12表达特点,统计分析DAP12在肝癌及癌旁组织的表达与CD163表达的关系,以期明确两者表达的相关性。第二部分我们收集94例肝癌样本详细的临床指标及预后生存数据,通过统计学方法分析DAP12与肝癌患者临床资料的相关性。进一步将单因素分析获得的阳性指标行单因素及多因素生存分析,明确影响肝癌患者预后的独立危险因素。结论通过连续石蜡切片免疫组化、冰冻切片免疫荧光检查明确了DAP12主要表达于肝癌间质细胞的胞膜和或胞浆中,肝癌组织中DAP12及CD163阳性细胞分布不均匀,在癌细胞团的周围有相对聚集性分布特点,而在癌旁组织中,阳性细胞相对均匀分布在条索状肝细胞周围的肝窦区,且同一标本DAP12阳性表达细胞与CD163阳性表达细胞位置基本重叠。在组织芯片免疫组化染色结果分析中,肝癌及癌旁组织中DAP12及CD163阳性表达密度数值为非正态分布数据,DAP12在肝癌组织中浸润密度中位数为10个/400倍镜下,癌旁组织为13,CD163在肝癌组织中位数为8,癌旁组织为10;DAP12及CD163在癌旁组织表达均高于肝癌组织(p<0.001,p=0.002),DAP12与CD163在肝癌组织中阳性细胞浸润密度无统计学差异(P=0.310),且DAP12与CD163在肝癌中的表达存在明显相关性(r=0.775)。通过对照肝癌及癌旁组织中的CD163的表达,间接明确了DAP12在肝癌组织中阳性表达的间质细胞主要为CD163阳性表达巨噬细胞族群,即主要为M2型肿瘤相关巨噬细胞族群。肝癌组织DAP12+巨噬细胞浸润密度与肝癌临床资料的相关性分析,结果提示DAP12高、低表达与肿瘤直径、病理组织分级及TNM分期相关(P=0.007、0.036、0.013),而在性别、年龄、HBsAg表达、血清AFP、肿瘤数目、血管侵犯及区域淋巴结转移这些临床数据方面,率的比较无统计学差异。Cox比例风险回归分析表明较晚的TNM分期及较高的癌组织DAP12+巨噬细胞浸润密度是影响HCC患者预后的独立危险因素,TNM分期HR为2.441,DAP12+巨噬细胞浸润密度HR为2.036。Kaplan-Meier法生存分析表明DAP12高表达组患者的生存时间显著短于低表达组患者(P=0.005),即肝癌组织中DAP12+巨噬浸润密度越高则生存率越低,预后越差。