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背景及目的肾癌又称肾细胞癌(RCC),是最常见的成年人肾脏实质性恶性肿瘤,其发病率仅次于膀胱癌,位居泌尿系肿瘤的第二位,且呈逐年上升趋势。肾癌发病较隐匿,早期易发生转移并缺乏典型的临床症状,出现较为明显的症状时绝大多数病人已经进入中晚期。目前肾癌的诊断仍依据影像学及医生的临床分析,这很难早期作出精确的诊断,不能为早期治疗赢得充分的时间。鉴此,国内外学者纷纷开始探索通过分子生物学手段早期诊断肾癌。凋亡抑制基因bcl-2编码的产物位于细胞膜型结构,特别是线粒体膜上,bcl-2可通过阻断Ca2+从内质网的释放、抑制caspase的活化和IP3信号转导通路等多种途径来抑制细胞凋亡。在正常细胞周期中,cyclinDl与细胞周期依赖激酶4(cyclin dependent kinase, CDK4)形成复合物启动DNA的合成,加速细胞从G1期向S期分化,完成细胞增殖；cyclinDl与bcl-2均为细胞分裂增殖的正性调节因子。P27kip1是细胞周期依赖性激酶抑制物,通过抑制cyclinD1-CDK4和cyclinE-CDK2等激酶复合物的活性来抑制细胞周期,在细胞周期中发挥着负性调节的作用。在胃癌、结肠癌、乳腺癌等多种肿瘤中,免疫组化结果显示cyclinD1、bcl-2均呈高表达,而p27kip1呈低表达。目前国内用半定量分析方法检测bcl-2、cyclinD1、p27kipl在肾癌中表达的研究甚少,bcl-2、cyclinD1、p27kip1三者之间相关性的研究国内尚未见报道。本实验旨在探索bcl-2、cyclinD1、p27kip1在肾癌中表达情况,分析bcl-2、cyclinD1、p27kip1在肾癌发生、发展中发挥的作用及机制,阐述上述三个因子在肾癌的临床诊断、预后判断及指导治疗中的价值,并分析bcl-2、cyclinD1、p27kip1在肾癌发生、发展中过程中的相关性。材料与方法1.选择2008年12月至2009年6月郑州大学第二附属医院、河南省肿瘤医院、河南省人民医院住院的RCC患者42例,其中男27例,女15例,年龄30-82岁,平均年龄57岁。所有病例均经病理证实,其中透明细胞癌33例,非透明细胞癌9例；临床病理分期Ⅰ期10例,Ⅱ期13例,Ⅲ期12例,Ⅳ期7例,其中Ⅳ期标本为介入治疗及免疫治疗后腔静脉癌栓消失、肿瘤体积缩小,患者强烈要求手术的肾癌标本。10例正常肾组织作为对照组,取自同期肾外伤、重复肾、输尿管中下段癌,术后病理均证实为正常肾组织。组织标本：术中切取约500mg新鲜组织后立即置入无RNA酶冻存管中接受RNAse-Blocker液浸泡,24 h后弃去液体转入-80℃冰箱冻存。2.应用RT-PCR的方法检测bcl-2、cyclinDl与p27kiplmRNA在肾癌组织中的表达,分析bcl-2、cyclinD1、p27kip1之间的关系。3.所有数据录入SPSS 11.0软件包进行统计分析,取双侧检验水准α=0.05。结果1.42例肾癌标本中bcl-2mRNA表达的中位值(0.56)显著高于正常肾组织的中位值(0.13)(P<0.05)；肾癌中cyclinD1 mRNA表达的中位值(0.65),显著高于正常肾组织(0.15)(P<0.05)；p27kiplmRNA在肾癌中表达的中位值(0.46),显著低于正常组织(0.86)(P<0.05)。在肾癌临床分期中bcl-2在Ⅰ+Ⅱ期高于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05),cyclinD1在Ⅰ+Ⅱ期低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05),p27kiplmRNA表达量随着临床分期的升高而降低(P<0.05)；bcl-2mRNA在肾透明细胞癌、非透明细胞癌(乳头状细胞癌+嫌色细胞癌)中的表达量分别为：0.58±0.19、0.39±0.18,t=-2.74,(P<0.05)。CyclinD1 mRNA在肾透明细胞癌、非透明细胞癌中的表达量分别为：0.66±0.08、0.55±0.08,t=3.50,(P<0.05)。p27kiplmRNA在肾透明细胞癌、非透明细胞癌中的表达量分别为：0.49±0.2、0.45±0.16,t=0.50,(P>0.05),差异无统计学意义。2.偏相关分析示p27kip1与cyclinD1之间相关系数为-0.57,(P<0.05),呈负相关性；p27kiP1与bcl-2之间相关系数为0.44,(P<0.05)呈正相关性,而cyclinD1与bcl-2之间相关系数为-0.06,(P<0.05),两者之间无相关性。结论1.bcl-2、cyclinD1mRNA在肾癌中表达显著高于正常对照组,在肾透明细胞癌中明显高于非透明细胞癌；p27kiP1在肾癌中表达显著低于正常对照组,在肾透明细胞癌与非透明细胞癌组之间无显著差异。2.检测bcl-2、cyclinD1、p27kipl mRNA的表达量可作为诊断及评价肾癌的指标。3.在肾癌的发生发展中p27kip1与cyclinD1负相关、与bcl-2正相关；而cyclinD1与bcl-2之间无相关性。