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动脉粥样硬化（AS）是严重心血管和缺血性卒中（IS）的潜在病理过程,动脉中的脂质沉积和纤维化以及炎症是动脉粥样硬化进展的重要触发因素。随着社会经济发展和物质水平的提高,高能量摄入及高脂进食引发的高脂血症、高血糖和高血压等问题是多种心血管疾病的诱因,血管中脂类物质,如胆固醇沉积和其引发的炎症反应是诱导动脉粥样硬化疾病发生的重要因素。巨噬细胞在多种疾病发展过程中通过增强免疫应答发挥作用,巨噬细胞炎症反应是动脉粥样硬化斑块形成和破裂病程中的重要生理过程。微小核糖核酸（Micro RNA,mi RNA）是一种短的内源性非编码糖核酸（RNA）,由大约22个核苷酸组成,其作用是转录后调节基因表达,在多种人体急性和慢性炎症反应中均能够见到mi RNA的身影。mi R-223-3p是人体内参与炎症反应的重要mi RNA,研究表明抑制巨噬细胞中mi R-223-3p表达促进炎症发生,同时促进饮食诱导的脂肪组织炎症。因此,mi R-223-3p在动脉粥样硬化疾病进程中可能通过调节巨噬细胞炎症反应发挥作用。目的:本研究对mi R-223-3p的功能进行深入探索,并对其发挥作用的分子机制进行研究。方法:1.对纳入研究的研究患者采集其静脉血和颈动脉组织,按照是否存在动脉粥样硬化分成实验组和对照组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-time PCR,q PCR）方法检测其血清中mi R-223-3p水平、颈动脉斑块或组织中的mi R-223-3p水平,U6基因作为内参,通过2-ΔCT对mi R-223-3p表达水平进行定量;对比AS患者中稳定性斑块和不稳定性斑块mi R-223-3p的表达水平。通过Movat染色研究实验组和对照组血管在形态学的差异。2.构建AS小鼠动物模型研究mi R-223-3p的功能,将无特定病原体（Specific Pathogen-Free Organisms,SPF）小鼠被随机分为对照组和高脂饮食组,分别饲喂正常饲料和高脂饲料（High-Fat Diets,HFD）,高脂饲料配方为0.15%胆固醇和21%脂肪,喂食12周后取两组小鼠主动脉组织制作石蜡切片（Formalin Fixed Paraffin Embedded,FFPE）,并采用Movat染色法观察两组小鼠主动脉细胞形态学差异。3.荧光原位杂交技术（Fluorescent in Situ Hybridization,FISH）法鉴定内膜巨噬细胞（CD68+）和不稳定性斑块动脉粥样硬化病变中的mi R-223-3p定位。采用腺相关病毒血清型9载体通过尾静脉注射法转化Apo E基因敲除（Apo E-/-）小鼠以过表达mi R-223-3p。采用Movat染色法对小鼠主动脉根和肌层组织进行染色,观察细胞形态学差异。采用q PCR检测mi R-223-3p过表达后巨噬细胞中阿尔法肌动蛋白（α-Actin）、CD68+和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达。4.通过生物信息学分析对mi R-223-3p的潜在基因和通路进行推测,从公共数据库下载和AS相关的GSE34822数据集,通过在线工具预测mi R-223-3p的靶向目标基因;并通过体内、体外实验研究mi R-223-3p对下游目标基因的调控作用。在转染mi R-223-3p模拟物和对照组（normal control,NC）小鼠中,采用双重免疫荧光标记法和蛋白质印迹法（Western Blot）评估炎性细胞因子含量和p-ERK1/2表达水平。5.在体外实验中,巨噬细胞在含有氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein,ox-LDL）刺激的培养基中培养,将mi R-223-3p模拟物和NC分别转入RAW264.7巨噬细胞中,并加入ERK1/2激动剂血小板活化因子C16（C16-PAF）进行处理,采用Western blot法检测对照组和干预组中炎症因子的蛋白水平。本研究中所有实验独立重复3次,实验数据采用Graph Pad Prism 9.02软件进行统计和分析,实验数据以平均值±标准差（SD）表示,对照组和实验组之间差异通过单因素方差分析（ANOVA）或t检验（Student’s t-test）评估。P＜0.05时,具有统计学意义。结果:与对照组相比,AS患者颈动脉斑块和静脉血清中mi R-223-3p的表达水平降低50%;在AS斑块中稳定性斑块和不稳定性斑块中的mi R-223-3p存在统计学差异。FISH结果表明mi R-223-3p与CD68+巨噬细胞共定位于AS患者的不稳定性斑块AS病变中。与NC组相比mi R-223-3p模拟物尾静脉注射小鼠主动脉组织中AS病变程度显著降低,AS病变区由3452±353μm2降低至2292±192μm2;mi R-223-3p模拟物组小鼠巨噬细胞（CD68+）的斑块区域染色阳性细胞数量显著减少接近50%,而α-Actin（SMA）染色增加约40%。ELISA结果显示,与NC组相比mi R-223-3p模拟物组小鼠免疫阳性斑块组织中TNF-α相对荧光密度由1.05±0.04降低至0.76±0.03,说明mi R-223-3p通过抑制巨噬细胞中免疫炎性因子表达水平抑制AS斑块形成。根据mi RNA与m RNA结合原则,通过在线工具分析mi R-223-3p的目标基因,结果表明丝裂原活化蛋?激酶激酶1（Mitogen-Activated Protein Kinase Kinase 1,MAP2K1,MEK1）可能是mi R-223-3p的靶向基因。在转染mi R-223-3p模拟物的巨噬细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶（Phosphorylated extracellular signal regulated kinase,p-ERK1/2）蛋白含量显著降低,p-ERK1/2:total-ERK1/2比值由1.1降低至0.4,表明mi R-223-3p模拟物降低了体内外MEK1/ERK1/2信号通路的激活。MEK1/ERK1/2信号激动剂（C16-PAF）逆转了mi R-223-3p介导的MEK1/ERK1/2信号通路和炎症反应的抑制。结论:综上所述,我们的结果证实mi R-223-3p可通过MEK1/ERK1/2信号通路负性调节巨噬细胞的炎症反应,在AS疾病进程中发挥重要作用,因此mi R-223-3p成为一个新的潜在治疗靶点以预防和缓解AS,为AS发病机制提供理论基础和治疗提供可能的治疗靶点。