【摘 要】
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目的:本研究拟观察隔药饼灸对实验性自身免疫性甲状腺炎(Experimentalautoimmunethyroiditis,EAT)大鼠甲状腺组织miRNA表达谱的影响,并探讨隔药饼灸对EAT大鼠的免疫调节机制。拟阐明隔药饼灸可能通过影响EAT大鼠甲状腺miRNA表达谱,抑制免疫细胞因子的表达和炎症信号通路的激活,减少炎症介质的释放,起到改善甲状腺自身免疫炎症的作用,
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目的:本研究拟观察隔药饼灸对实验性自身免疫性甲状腺炎(Experimentalautoimmunethyroiditis,EAT)大鼠甲状腺组织miRNA表达谱的影响,并探讨隔药饼灸对EAT大鼠的免疫调节机制。拟阐明隔药饼灸可能通过影响EAT大鼠甲状腺miRNA表达谱,抑制免疫细胞因子的表达和炎症信号通路的激活,减少炎症介质的释放,起到改善甲状腺自身免疫炎症的作用,以期为隔药饼灸治疗HT的临床应用提供更多的理论依据。方法:将体重100±20g的雌性清洁级SD大鼠随机分成正常组和造模组。采用完全和不完全弗氏佐剂乳化的猪甲状腺球蛋白和碘剂联合免疫的方法制备EAT大鼠模型。确定造模成功后,再将造模大鼠随机分为三个组:模型组、隔药饼灸组和西药组。隔药饼灸组大鼠取“大椎、命门”及“天突、关元”2组穴位进行相应的治疗,每日取1组穴位,两组穴位交替使用,每天灸1次,每穴2壮,连续30天;西药组用优甲乐悬浊液(1μg/2ml)灌胃,每天1次,连续30天。干预结束后,取各组大鼠血清和甲状腺组织。HE染色法观察各组大鼠甲状腺组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血清中TGAb、TPOAb、TSH、FT3、FT4以及IL-6、TNF-α蛋白的浓度;miRNA高通量测序(RNA-seq)检测大鼠甲状腺组织miRNA表达谱的变化,预测差异表达miRNA的靶基因,并进行功能注释和KEGG通路等生物信息学分析,并对隔药饼灸可调控的差异表达miRNAs进行验证;实时定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠甲状腺组织中免疫相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6、Foxp3、GATA3、IL-17、IL-23、IL-23RmRNA的表达;免疫组化法检测各组大鼠甲状腺组织中TLR受体信号通路相关蛋白TLR3、TLR4、HMGB1、RAGE、HSP60、MyD88、TRIF、IRAK1、TRAF6、NF-κBp65的表达。结果:1.甲状腺组织病理学观察:光镜下显示正常组大鼠甲状腺滤泡结构清晰,呈圆形或椭圆形,滤泡腔内充满胶质,未见有淋巴细胞浸润。模型组大鼠甲状腺滤泡结构广泛破坏、萎缩,可见大量淋巴细胞浸润,间质有纤维组织增生。隔药饼灸组大鼠甲状腺组织形态较模型组有一定改善,甲状腺滤泡形状稍规则,可见少量甲状腺滤泡破坏,间质有少量淋巴细胞浸润和纤维组织增生。西药组大鼠部分甲状腺滤泡破坏,可见少量淋巴细胞浸润和纤维组织增生。2.隔药饼灸对EAT大鼠甲状腺抗体和功能的影响:甲状腺抗体:与正常组比,模型组大鼠血清TPOAb、TGAb的浓度均升高(均P
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