大蒜素对TNBS诱导大鼠结肠炎的治疗作用及IL-6/JAK/STAT3途径探讨

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目的:炎症性肠病是临床上一类多种病因所导致的、机体异常免疫介导的肠道疾病,其突出特点是肠道反复发生的慢性非特异性炎症,主要疾病类型包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。既往大量的研究认为,过度和失控的人体免疫产生针对肠道的正常肠黏膜及菌群免疫应答导致IBD的病理生理改变。有研究显示,大蒜素能够调节机体免疫,本实验使用TNBS/乙醇复制结肠炎模型,通过大蒜素干预以了解大蒜素在结肠炎中的治疗作用并探讨可能与IL-6/JAK/STAT3途径相关。方法:50只SD雄性大鼠利用随机数表法分5组,每组10只分别命名为:①空白对照组、②TNBS模型组、③大蒜素治疗组、④美沙拉嗪治疗组、⑤大蒜素+美沙拉嗪治疗组。将空白对照组以外的其余四组大鼠使用一定剂量的5%TNBS+50%乙醇溶液灌肠后复制大鼠结肠炎模型,每日使用大蒜素(剂量:30mg/kg)、美沙拉嗪(剂量:30mg/kg)分别及联合干预③-⑤组治疗组;空白对照组及TNBS模型组使用相同剂量的生理盐水灌胃,连续灌胃干预10天,期间每日观察大鼠毛发、精神状态、进食活动量等状况。同时每日记录大鼠体重,并观察大鼠大便次数、性状和血便等情况,然后进行DAI评分。腹腔麻醉处死大鼠后,取其血清及结肠进行相应观察、检测;采集各组大鼠结结肠肉眼观察其病变情况,HE染色处理大鼠结肠标本,并进行显微镜下观察并进行组织学评分。以ELISA方法检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的水平,用免疫组化法检测各组大鼠结肠组织细胞中STAT3、SOCS3的表达情况并计数。使用聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测结肠组织中STAT3、SOCS3mRNA表达量。利用专业统计学软件分析实验数据,得出相应结果。结果:1.大蒜素治疗组、美沙拉嗪治疗组、大蒜素+美沙拉嗪治疗组大鼠以及TNBS模型组与空白对照组比较各项比较,大鼠DAI评分、体重、结肠组织学评分、HE染色下病理改变等指标均有显著差异,结肠炎模型复制成功;2.ELISA法检测大鼠血清中IL-6水平,TNBS模型组与三组治疗组均存在显著差异(p<0.05),从均值上来看,大蒜素+美沙拉嗪治疗组检测血清IL-6水平最低;ELISA法检测大鼠血清中IL-10水平,TNBS模型组与三治疗组均存在显著差异(p<0.05),从均值上来看,大蒜素+美沙拉嗪治疗组血清检测IL-10水平最高,说明大蒜素具有抑制炎症因子IL-6分泌的作用,而大蒜素联合美沙拉嗪对炎症因子的抑制作用最强;3.免疫组化法显示在用药干预10天后,结肠组织中阳性细胞计数上,STAT3中表达阳性细胞数最多的是TNBS模型组,空白对照组表达阳性细胞计数最少,治疗组间比较,大蒜素+美沙拉嗪治疗组表达STAT3量最少,与大蒜素治疗组存在统计学差异。在SOCS3的阳性细胞计数表达中,TNBS模型组分别与余下4组分别比较存在差异具有统计学意义(P<0.05);治疗组间比较,大蒜素+美沙拉嗪治疗组表达SOCS3细胞计数最多,与大蒜素治疗组存在统计学差异。4.空白对照组的结肠粘膜中STAT3及SOCS3mRNA表达较少;TNBS模型组表达STAT3对比美沙拉嗪治疗组及大蒜素+美沙拉嗪治疗组均明显增高,差异有统计学意义(p<0.05),其中TNBS模型组与大蒜素+美沙拉嗪治疗组比较差异更显著;在SOCS3的表达中,TNBS模型组对比各治疗组均明显降低,有显著差异(p<0.05)。结论:1.本实验TNBS/乙醇法大鼠结肠炎复制模型成功;2.各组大鼠死亡率、体重变化、病理组织学改变、血清学检测水平等各方面检测有差异,经评估分析发现,大蒜素灌胃对IBD模型有一定治疗作用,大蒜素联合美沙拉嗪使用效果优于单独使用大蒜素或美沙拉嗪;3.大蒜素可能通过减低IL-6的分泌,抑制IL6/JAK/STAT3途径的表达以减轻结肠炎症。
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