B细胞活化因子(B cell activating factor,BAFF)属于肿瘤坏死因子超家族的一员。它是外周B细胞存活的重要因子。在动物模型中,BAFF的过表达会导致自身免疫病样症状的发生。研究发现,在不同类型的自身免疫性疾病患者的血清中,BAFF的含量是明显升高的。近期研究还发现BAFF还与部分肿瘤疾病的发生有关。因此,BAFF的拮抗剂可能成为治疗自身免疫疾病和某些肿瘤的新型药物。由于BAFF和受体TACI具有高亲和力,可特异性识别BAFF并与之结合,因此体外构建表达的TACI可中和体内过表达的BAFF,抑制B细胞的增殖和活化,缓解和治疗与BAFF相关的自身免疫病和B细胞肿瘤。本课题的研究为开发BAFF拮抗剂治疗BAFF相关疾病提供了实验基础。本课题研究方法:对BAFF受体TACI融合蛋白原核表达与纯化,在体外研究TACI对B系淋巴瘤细胞增殖的影响,并初步分析了TACI抑制肿瘤细胞系增殖的机理。主要研究结果:(一)TACI融合蛋白原核表达纯化:本实验室已将钓取的TACI基因片段连接到原核表达载体pET-32a上。将重组正确的质粒转化大肠杆菌Rosetta,获得TACI表达工程菌。经IPTG诱导,融合蛋白利用镍金属螯合琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化。(二)TACI抑制B系淋巴瘤细胞系细胞的增殖:某些B系淋巴瘤细胞系表达BAFF及其受体,并且通过自分泌BAFF来促进肿瘤细胞的增殖。可溶性TACI蛋白能够通过特异性阻断BAFF抑制B系淋巴瘤细胞系的增殖,并且具有剂量依赖性。(三)TACI抑增殖的机理:TACI能够将Daudi细胞阻滞在DNA合成期(即S期) ,而且具有一定的剂量依赖性。TACI对Daudi细胞增殖抑制作用,主要是通过调控细胞周期,而非凋亡达到抑增殖效果。