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根据全球癌症统计分析数据表明,食管癌发病率在恶性肿瘤中位居第七位,总体死亡率位于第六位。在中国,虽然手术联合化疗的治疗方案已经成熟应用于临床,但是效果不甚理想,食管癌的发病率和死亡率依旧逐年上升。因此寻找针对食管癌更有效的治疗靶点具有重要意义。在恶性肿瘤发生发展过程中,血管生成对于肿瘤的快速生长和转移发挥着重要的作用。因此,靶向血管生成是治疗肿瘤的一种有效方法。目前,一些抗血管生成的靶向药物作为各种肿瘤的治疗策略已应用于临床实践,并改善临床患者的生存结果。然而,在食管癌中进行的抗血管生成治疗的临床试验相对较少。因此,迫切需要进一步研究开发抗食管癌血管生成的新疗法。YAP作为Hippo通路的关键下游效应器,发挥癌基因的作用。近来研究表明,YAP在肿瘤血管生成中起着重要作用。因此,靶向YAP可能被认为是治疗食管癌的一种新的的策略。Verteporfin是一种YAP抑制剂,可以通过破坏YAP-TEAD的相互作用达到抑制肿瘤细胞增殖、迁移和血管生成、诱导细胞凋亡的效果。此外,VP还可以抑制视网膜母细胞瘤和胰腺导管腺癌的肿瘤血管生成。然而,VP在调控食管癌进展和肿瘤血管生成中的作用目前尚不清楚。本课题将研究YAP抑制剂Verteporfin在食管癌恶性进展以及耐药中的作用,并探究其是否通过靶向肿瘤血管生成微环境得以实现。目的:1.探究YAP抑制剂Verteporfin对食管癌细胞恶性进展的影响;2.探究Verteporfin对肿瘤血管生成的影响;3.探究Verteporfin通过靶向肿瘤血管生成逆转食管癌紫杉醇耐药。方法:1.通过细胞毒性实验、克隆形成实验、DAPI染色、Western blot、划痕愈合和侵袭实验观察不同浓度Verteporfin对食管癌细胞恶性进展的影响;2.通过细胞毒性实验、克隆形成实验、DAPI染色、划痕愈合实验、体内外血管生成实验探究不同浓度Verteporfin对HUVEC增殖、凋亡、迁移和血管生成的影响;通过体内外血管生成实验、肿瘤细胞与内皮细胞的粘附和趋化实验以及Western blot检测血管生成相关分子探究不同浓度Verteporfin对食管癌细胞介导的血管生成的影响;3.通过小剂量诱导法构建紫杉醇低度耐药和中度耐药的食管癌细胞,通过细胞毒性实验、克隆形成实验、体内外血管生成实验观察紫杉醇和Verteporfin单独用药以及联合用药对食管癌紫杉醇不同耐药程度细胞的增殖和血管生成的影响。结果:1.不同浓度Verteporfin处理KYSE150和KYSE30后,细胞毒性实验和克隆形成实验显示,相比较于对照组,药物处理后的细胞增殖速度明显下降,克隆团形成数量也减少(P<0.05);DAPI染色结果显示,Verteporfin使细胞核发生浓缩,甚至出现凋亡小体,Western blot实验表明pro-caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05);划痕愈合和侵袭实验表明,Verteporfin浓度越大,细胞迁移和侵袭的能力越弱(P<0.05);2.不同浓度Verteporfin作用HUVEC后,细胞毒性实验和克隆形成实验显示,给药组的细胞增殖速度明显下降,克隆团形成数量也减少(P<0.05);DAPI染色结果表明,Verteporfin使细胞核发生浓缩,Western blot实验表明pro-caspse-3蛋白表达显著降低(P<0.05);划痕愈合实验表明,Verteporfin浓度与细胞迁移能力呈负相关(P<0.05);体内外血管生成实验显示,Verteporfin可以抑制HUEVC和食管癌血管生成的能力;通过肿瘤细胞与内皮细胞的粘附和趋化实验进一步证明Verteporfin可以通过减少肿瘤细胞和内皮细胞之间的相互作用进而抑制食管癌血管生成的能力(P<0.05);Western blot结果显示Verteporfin可能通过NF-κB/β-catenin/VEGFA/MMP-2信号通路抑制食管癌血管生成;3.通过细胞毒性实验确定食管癌耐药细胞株构建成功,并且发现相比较于单独用药,紫-杉醇和Verteporfin二者联合对食管癌耐药细胞的抑制作用更加明显;通过克隆形成实验发现,0.05μM紫杉醇和0.6μM Verteporfin单独作用食管癌耐药细胞后,克隆团数量减少,联合用药作用效果更加显著;体内外血管生成实验显示紫杉醇和Verteporfin联合用药抑制耐药细胞的肿瘤血管生成。结论:1.YAP抑制剂Verteporfin可以抑制食管癌细胞的恶性进展,促进细胞凋亡;2.Verteporfin可以抑制HUVEC的增殖、迁移和体内外血管生成的能力,促进细胞发生凋亡;同时也可以抑制食管癌的体内外肿瘤血管生成的能力,并且通过减弱食管癌细胞与HUVEC之间的粘附力和趋化性抑制食管癌血管生成;3.Verteporfin联合紫杉醇用药可以通过抑制肿瘤血管生成逆转食管癌耐药。