【摘 要】
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本文对Dkk-1/Wnt/β-catenin信号途径在肝癌细胞转移中的作用及其分子机制进行了研究。主要内容及结果过如下： ①将人肝癌细胞H7402接种联合免疫缺陷(SCID)鼠，60天后在SCID
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本文对Dkk-1/Wnt/β-catenin信号途径在肝癌细胞转移中的作用及其分子机制进行了研究。主要内容及结果过如下：
①将人肝癌细胞H7402接种联合免疫缺陷(SCID)鼠，60天后在SCID鼠身体赢弱时，引颈处死，取SCID鼠脏器组织进行原代培养和传代细胞培养，从肺组织中获得一个H7402细胞的转移亚克隆。肿瘤转移相关基因表达谱芯片检测结果表明，与H7402细胞相比，有11个转移相关基因在M-117402细胞中上调表达，13个转移相关基因在M-H7402细胞中下调表达。
②在建立上述肝癌细胞转移亚克隆的基础上，比较了具有不同转移能力的H7402细胞和M-H7402细胞中Wnt/β-catenin信号的差异。应用实时定量RT-PCR检测还发现wnt途径信号分子Wnt 1及受体Fz和Lrp 5 mRNA的表达水平在M-H7402细胞中上调。Westernblot分析结果显示，与H7402细胞相比，M-H7402细胞中phospho-β-catenin蛋白和Dkk-1蛋白表达下调，而β-catenin蛋白表达上调，提示M.H7402细胞中有B。catenin的积累，而H7402细胞中大部分的β-catenin已被降解。
③应用基因转染技术，将pcDNA3.1(-)一Dkk-1质粒导入M-H7402细胞。实现Dkk-1基因瞬时过表达。经Western blot检测发现，M-H7402细胞中过表达Dkk-1可导致β-catenin的表达水平明显下降，并促使c-Myc、cycline D1、PCNA和Bc12的表达水平下降，表明上述信号分子与Wm途径有关。
④建立了具有高转移倾向的人肝癌转移亚克隆细胞系M-H7402，与其亲本细胞系117402在遗传背景上具有很好的相似性，因此可以作为肝癌转移研究理想实验材料。
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