论文部分内容阅读
共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid, CLA)具有抑制动物脂肪沉积的作用,但其作用机制并不完全清楚。本论文结合动物营养学研究手段与分子生物学技术,从个体和分子水平系统探讨了CLA通过诱导脂肪细胞凋亡的方式来抑制猪的脂肪沉积,揭示其可能存在的作用机制。试验选用36头长白×荣昌仔猪,体重13.91+1.53kg,随机分为3个处理组,每个处理组3个重复,每个重复4头仔猪,分别饲喂含0%(对照组)、1%和2%CLA的日粮,试验持续30天。试验结束时,仔猪空腹12h后称重,随后从每个重复中选取2头体重适中的仔猪进行静脉采血,分离得血清,用以血液生化指标的测定。然后,仔猪放血屠宰,测量背部皮下脂肪厚度,剥离背部脂肪组织和腹部脂肪组织进行称重。分别取大块背最长肌和半腱肌,用以肌内脂肪含量测定。此外,每头仔猪分别取三份脂肪组织,分别用于形态学观察,Caspase-3、-8、-9等凋亡因子酶活分析,以及凋亡相关因子的基因和蛋白表达水平检测。主要试验结果如下：1.CLA显著降低了仔猪日均采食量(P<0.05),而对料重比影响不显著(P>0.05)。1%和2% CLA组分别使仔猪日均增重下降13.13%(P<0.05)和7.95%(P>0.05)。2.日粮添加CLA显著减少了仔猪的背部脂肪沉积量(P<0.05)。并且随着CLA添加水平的提高,背膘厚降低。利用生化分析仪检测血清,结果发现CLA对仔猪血清中的葡萄糖、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇等生化指标影响不明显(P>0.05),但显著降低了总胆固醇含量(P<0.05)。3.通过对脂肪组织切片的免疫荧光染色观察发现CLA处理组仔猪的背部脂肪细胞表现出明显的凋亡迹象,包括染色质聚集、核浓缩、DNA断裂等凋亡特征,尤其是2% CLA组脂肪细胞凋亡特征更为明显。酶活检测结果表明日粮添加CLA使仔猪背部脂肪组织中的凋亡因子Caspase-3、-8和-9的活力均显著升高(P<0.05)。荧光定量PCR和western blotting检测结果表明CLA处理下调了抑凋亡因子Bcl2的mRNA和蛋白表达,升高了促凋亡因子Bax和P53的mRNA及蛋白表达,同时增加Cyt-C的mRNA表达并且促进Cyt-C蛋白从线粒体释放到细胞质中。Caspase-3的mRNA表达上调和剪切型的Caspase-3蛋白水平的增加说明凋亡执行因子Caspase-3被激活并介导了脂肪细胞凋亡的发生。另一方面,CLA处理后还提高了脂肪细胞中TNF-α及其受体TNFR1的mRNA表达以及蛋白水平,而它们是死亡受体凋亡通路的标志因子。以上这些结果提示线粒体通路和死亡受体通路都参与了CLA诱导的猪背部脂肪细胞凋亡。以上试验结果表明,日粮补充CLA能够通过诱导脂肪细胞凋亡的方式来减少仔猪的背部脂肪沉沉,且线粒体通路和死亡受体通路都参与了凋亡信号的传递。