组蛋白乙酰化在氯化钴致神经细胞损害中的作用

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目的本研究以SHSY5Y细胞作为神经细胞体外培养对象,研究氯化钴(CoCl2)对SHSY5Y细胞组蛋白乙酰化水平的影响和机制。
  方法(1)用终浓度分别为0、50、100、200、300、400μMCoCl2处理SHSY5Y细胞0、4、8、12、24h,CCK8试剂检测细胞增殖。(2)用终浓度分别为0、50、100、200、300、400μMCoCl2处理SHSY5Y细胞24h;0、300μMCoCl2处理SHSY5Y细胞0、4、8、12、24h,提取细胞核蛋白测定Ac-H3、Ac-H4水平。(3)用0、300μMCoCl2处理SHSY5Y细胞0、4、8、12、24h,提取细胞核蛋白,分别检测HATs和HDACs的活性。(4)0、300μMCoCl2处理SHSY5Y细胞0、4、8、12、24h,染毒结束后,提取细胞总蛋白用免疫印迹检测HAT和HDACs(HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC4)蛋白表达水平。
  结果
  (1)不同浓度CoCl2(100、200、300、400μM)处理SHSY5Y细胞不同时间(4、8、12、24 h)后,与对照组比较,不同浓度CoCl2处理显著抑制SHSY5Y细胞增殖,差异有统计学意义(p<0.05)。
  (2)①与对照组比较,100、200、300、400μMCoCl2处理24h后,组蛋白H3乙酰化水平下降,差异有统计学意义(p<0.01);②与对照组比较,200、300、400μMCoCl2处理24h后,组蛋白H4乙酰化水平下降,差异有统计学意义(p<0.01);③与对照组比较,组蛋白H3、H4乙酰化水平在300μMCoCl2处理SHSY5Y细胞8、12、24h后均显著下降,差异有统计学意义(p<0.05)。
  (3)与对照组比较,200、300、400μMCoCl2处理24h后,HATs活性降低,差异具有统计学意义(p<0.01);而50、100、200、300、400μMCoCl2处理24h后,HDACs活性改变无统计学意义;与对照组比较,300μMCoCl2染毒12、24h,HATs活性显著下降,差异有统计学意义(p<0.01);而用300μM CoCl2处理SHSY5Y细胞4、8、12、24h后,HDACs活性改变无统计学意义(p>0.05)。
  (4)与对照组比较,300μMCoCl2染毒12、24h后,HAT表达显著下降,差异具有统计学意义(p<0.05);300μMCoCl2处理SHSY5Y细胞4、8、12、24h后,HDACs表达改变无统计学意义(p>0.05)。
  结论(1)不同浓度CoCl2处理显著抑制SHSY5Y细胞增殖。(2)CoCl2处理可引起SHSY5Y细胞组蛋白乙酰化水平下降。(3)CoCl2处理引起SHSY5Y细胞HATs活性降低;但对HDACs活性改变无影响。CoCl2处理可致HAT蛋白表达下降,而对HDACs蛋白表达无影响。
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