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背景:铥激光前列腺切除术(Thulium laserresection oftheprostate,TmLRP)是目前治疗良性前列腺增生症(Benign prostatic hyperplasia,BPH)的主要微创手术方法之一,出血少、创伤小、并发症少。但尿路非感染性炎症(Sterile inflammation,SI)是术后常见的问题,术后一月发生率高达17%。缺乏有效治疗手段,严重影响术后恢复和疗效,然而相关研究国内外却鲜有报道。目前TmLRP术后尿路SI的发生发展机制不清楚。前期研究中,我们通过手术切取前列腺组织标本的检测,发现损伤相关分子模式(Damage associated molecular patterns,DAMPs)启动的固有免疫应答可能是诱发SI的原因之一。最新研究发现活性氧簇(Reactiveoxygenspecies,ROS)在部分慢性前列腺炎患者精液中高表达,而其被证实可激活NLRP3炎性小体(Inflammasome)诱导一系列炎症反应,提示ROS-NLRP3所介导的信号通路可能在泌尿系统炎症进程中起重要作用,启发我们沿此方向寻找TmLRP术后尿路SI的针对性治疗方案。目的:1、研究TmLRP术后尿路SI的发生发展阶段。2、阐明DAMPs启动固有免疫应答、促进炎症因子表达与ROS-NLRP3信号通路的关系。3、阐明ROS-NLRP3信号通路在TmLRP术后尿路SI中的表达和机制,为减轻SI寻找靶点。方法:1、ELISA方法检测25例TmLRP患者手术前后不同时间血清、尿液中炎症细胞(粒细胞、单核巨噬细胞等)和炎症因子(HSP70、IL-1β、IL-18)水平;术后即刻切取创面前列腺组织,以阴性BPH穿刺标本为对照,通过免疫组化检测HSP70的表达定位。2、体外培养单核巨噬细胞THP-1,HSP70刺激后应用FCM、ELISA、Western Blot 和 qRT-PCR 检测 ROS、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 的表达情况;通过ROS抑制剂NAC预处理THP-1,观察上述因子的表达。3、建立实验犬TmLRP动物模型,对照组10只实验犬模拟TmLRP手术操作,术前、术后不同时间点ELISA检测血清、尿液炎症因子(HSP70、IL-1β、IL-18);HE染色、免疫荧光、免疫组化检测前列腺创面标本粒细胞、单核巨噬细胞浸润及NLRP3、Caspase-1表达水平,确定动物模型SI发生发展阶段和强度变化;另设立抑制组10只实验犬,通过术前使用ROS抑制剂NAC预处理手术通道,观察其对动物模型SI发生强度的影响。结果:1、临床标本检测提示TmLRP术后7天内,尿液中炎症因子迅速高表达,在术后3-5天达到峰值;尿液HSP70、TNFα、IL-1β的变化趋势与外周血中性粒细胞比例的变化趋势相似,IL-18与外周血单核细胞、嗜酸性粒细胞比例的变化趋势相似;创面前列腺组织即刻高表达HSP70。2、细胞实验提示体外HSP70刺激单核巨噬细胞THP-1后,ROS、NLRP3、Caspase-1、IL-18表达升高,12h达到峰值,IL-1β于6h达到峰值。通过ROS抑制剂NAC预处理THP-1,HSP70刺激后上述各因子的表达较研究组降低。3、动物模型实验提示犬TmLRP术后SI急性炎症期和慢性炎症期。急性期为手术至术后7天,其中术后3天为急性炎症高峰。慢性炎症期为术后7天至术后28天,其中术后14天为慢性炎症高峰。HSP70,NLRP3,Caspase-1,IL-1β,IL-18在术后SI不同的时间点均高表达。NAC预处理手术创面可以减少术后ROS释放,抑制NLRP3信号通路表达,减轻术后血液、尿液和前列腺创面组织SI。结论:1、TmLRP术后SI分为急性炎症期和慢性炎症期。急性期为手术至术后7天,其中术后3天为急性炎症高峰。慢性炎症期为术后7-28天,其中术后14天为慢性炎症高峰。不同时段外周血炎症细胞和尿液炎症因子表达强度变化。2、TmLRP术后创面即刻表达HSP70,激活ROS-NLRP3信号通路,继而活化Caspase-1,促进炎症因子IL-1β、IL-18表达,诱发SI。3、ROS抑制剂NAC预处理犬前列腺手术通道后,可以抑制ROS-NLRP3信号通路,减轻TmLRP术后SI。ROS-NLRP3信号通路可以作为防治SI的靶点。