目的:构建小鼠Spag6L基因的真核表达质粒,并研究其在哺乳动物细胞内的表达与定位。构建上游启动子荧光素酶报告基因重组质粒,并检测其转录活性。方法:以小鼠的睾丸c DNA基因文库作为模版,PCR扩增Spag6L基因全长序列,测序正确后亚克隆至p EGFP-N2和pc DNA3真核表达载体中并酶切鉴定。将构建成功的重组表达质粒转染至COS-7与CHO细胞中,Western-blot法检测COS-7细胞中Spag6L蛋白表达,激光共聚焦扫描显微镜观察Spag6L蛋白在CHO细胞内的定位。构建上游启动子荧光素酶报告基因重组质粒Spag6L/PGL3,用双荧光素酶法检测其转录活性并与Spag6进行比较。结果:重组质粒Spag6L/pEGFP和Spag6L/pc DNA3经双酶切后产生的1.5kb的目的插入片段,经测序证实与Spag6L基因一致。GFP-Spag6L融合蛋白分子量为82k D,Spag6L蛋白分子质量为56k D。Spag6L蛋白在CHO细胞中主要定位于细胞质,以微管和囊泡表达为主。Spag6L上游启动子转录调节序列荧光素酶活性明显强于Spag6。结论:构建Spag6L/p EGFP、Spag6L/pc DNA3和Spag6L/PGL3重组质粒成功,为进一步探究Spag6L基因与Spag6基因的关系以及Spag6L基因在精子发生中的作用奠定了基础。