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生物和非生物胁迫严重影响植物的生命进程。在植物的生长发育过程中中屮,为适应各种外界环境,最大限度的减少胁迫对自身的伤害,它们会不断地感应其生活环境的变化,并且选择适当的机制来应答这些变化。其中,植物激素,作为信号标签,扮演着非常重要的角色。一方面各种激素不仅调控植物的生长发育进程,也能与植物所生存的外部环境相互作用,从而调节植物自身对环境的适应性。另一一方面,植物产生激素的浓度、种类以及产生的时间都会随生长环境的变化而变动。而且,植物体还可以通过重新调整不同激素信号通路,从而更有效地应对这些自然变化和外界刺激来维持生长和发育。水杨酸(Salicylic Acid,SA)作为植物内生激素,不仅在植物抗病中扮演着重要角色,而且可以激活防御信号来诱导植物合成防御化合物。SA能够诱导植物产生获得性抗性,从而有效的抑制病程发展。茉莉酸(Jasmonic Acid,JA)也是一种植物内生调节物质,作为信号物质在植物生长发育,尤其是抵御生物和非生物胁迫等生物学进程中起着非常重要的作用。JA信号通路包含了 2条支路:一条是能对机械损伤和害虫侵蚀做出应答的MYC支路;另一条是能增强死体营养型病原体抗性的ERF支路。激素调控的信号途径在植物生长、发育和抗病等多种生命进程中并非是完全独立存在的,在许多情况下都相互关联,并相互作用,有的相互增强,有的互相抑制,从而精细调控不同信号途径。SA和JA之间存在协同作用和拮抗作用,对它们协同作用和拮抗作用相互影响调控的研究是植物能有效地调节应激反应信号转导网络的关键策略。不仅如此,SA和JA并能与乙烯(Ethylene,ET)等其它激素相互作用。JA、SA和ET是植物抗病信号转导途径中的重要调控因子。它们之间的相互作用可以最大限度的提高植物对相应胁迫的适应能力。因因此,找到它们相互作用的联系点在研究其对增加植物抗性、探讨抗性机制等方面都非常关键。PLANTDEFFINSIN1.2(PDF 1.2)表达量的升高可以作为激活茉莉酸ERF/ORA 59支路的标记,ET/JA能够诱导其表达而SA则抑制其表达。所以,对其表达模式的研究能够了解三者相互作用的相关机理。我们发现植物体内ORA 59蛋白的有效含量可作为协调点调控了 JA和ET的协同作用以及和SA的拮抗作用。已知的研究已经证实EIN 3能和JAZ、MYC 2和DELLA蛋白相互作用。我们进一步证实了 EIN 3还能够与ORA 59相互作用,并在信号通络的整合中起了非常关键的作用。通过对PDF1.2表达模式调控的研究,我们得出了以下主要结果:1.MOCK、JA、SA单独和SA+JA的处理下,对野生型、ctr1和ein3/eil1双突变体中PDF 1.2表达量的分析,发现JA对PDF 1.2表达的诱导和SA对PDF 1.2表达的抑制依赖于EIN 3/EIL 1。并且观察到JA对PDF 1.2转录水平的诱导和SA对PDF1.2转录水平的抑制在土培条件下比在培养基更为明显。2.JA+SA的处理下,ein3/el 1双突变体和35S:OAA 59/ein3/eil 1转基因植株中PDF 1.2表达量的升高大于用其中一一种激素(JA或者SA)单独处理后表达量的升高。当植物缺失EIN 3和EIL 1时,JA和SA之间存在相互作用。并对PDF 1.2转录水平的调控起着一一定的作用,推测此互作可能是通过ORA59和EIN 3/EIL 1来共同实现的。3.当与MOCK处理相比较时,SA能增加ERF1在野生型和ein3/eil 1双突变体中的表达水平。但是由于在ein3/eil 1双突变体中ERF1表达量的升高要低于野生型中中中ERF 1表达量的升高。因此SA对ERF1转录水平的诱导依赖于EIN 3/EIL 1,至少部分依赖于 EIN 3/EIL 1。4.MOCK、JA、SA 单独和 JA+SA 的处理下,通过对 35S:ORA 59:LUC/Cl 和 35S:ORA 59:LUC/ein3/eil 1转基因植株中中中ORA 59:LUC活性的比较,发现JA介导的对ORA 59转录水平的调控依赖于EIN 3/EIL 1,而对ORA 59蛋白水平的调控不依赖于EIN 3/EIL 1。然而SA介导的对ORA 59转录水平的调控不依赖于EIN 3/EIL 1,而对ORA 59蛋白稳定性的调控依赖于EIN 3/EIL 1。5.利用农杆菌介导瞬时转化烟草,发现了 ORA59和EIN3共同定位在细胞核。此外,通过荧光素酶互补实验发现ORA 59和EIN 3之间存在蛋白质相互作用。利用酵母双杂交系统在找到ORA 59在酵母中中屮的自转录活性区域的同时,验证了 ORA59和EIN 3之间的蛋白质互作。并且发现EIN 3不仅能和ORA 59全长蛋白互作,还能和ORA 59蛋白的不同部位ORA59-M、ORA59-C相互作用。6.在蛋白质稳定性实验中,我们通过添加MG132蛋白酶体抑制剂测定烟草叶片中中中ORA 59:LUC的活性。发现EIN 3与ORA 59之间的蛋白质互作调控了 ORA 59被26S蛋白酶体的降解,从而调节ORA59蛋白质的稳定性。7.通过比较MOCK和SA处理下,35S:EIN3:LUC转基因植株中EIN 3:LUC的活性,发现SA增加了植物中中中EIN 3蛋白质丰度。通过对5XEBS:GUS转基因植株GUS活性的观察发现SA参与了 ET信号通路的调节。