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目的：通过检测、分析正常肺组织和非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)中多肿瘤抑制基因(multipletumor-suppressor1, MTS1又称p16),细胞周期蛋白(CyclinDl)和视网膜母细胞瘤基因(Retinoblastoma gene, Rb),探讨p16-CyclinDl-CDK4/6-Rb通路在非小细胞肺癌(NSCLC)发病机制中的作用及与预后的关系。方法：运用免疫组化、分子生物学技术(PCR, PCR-SSCP, MSP,DNA测序和DPCR技术等)和病理学技术对人体正常肺组织,非小细胞肺癌癌组织中细胞周期相关基因p16, cyclinDl和Rb,从蛋白质和DNA水平改变及其相互关系进行研究,并结合临床病理资料和随访资料进行分析。结果：1.应用免疫组化技术检测p16、CyclinDl和Rb的表达,结果显示NSCLC中p16-CyclinD1-Rb通路总异常率为97.6%(82/84)：p16、RB和CyclinDl的异常表达率分别为38.1%,51.2%和54.8%：提示p16-cyclinDl-Rb通路异常与NSCLC发病机制密切相关,三种蛋白的异常可单独或共同发挥作用。p16与Rb表达呈明显的负相关关系(P<0.01)；而CyclinDl与RB表达呈正相关(P<0.05)。Rb表达与NSCLC的分化程度呈负相关(P<0.05),提示其可能在肿瘤的演进中发挥作用。2.应用PCR-SSCP, MSP和DNA测序技术检测p16基因状态。共发现24/76例(31.6%)LMS中有p16基因异常,其中18例(23.7%)发生启动子区5’CpG岛甲基化,4例发生基因突变(2例在第2外显子编码区,2例在第2外显子与内含子接头处),2例存在纯合缺失。24例p16基因异常的NSCLC中p16蛋白阴性20例,弱阳性4例.研究结果提示p16基因失活与NSCLC的发病机制有关。启动子区5’CpG岛的甲基化是NSCLC中p16基因失活的主要方式,但也有少量点突变和缺失。3.应用DPCR技术检钡CCND1基因扩增。结果显示16/76例(21.1%)NSCLC存在CCND1基因扩增,均伴CyclinD1过表达。但仍有32/48例(66.7%) cyclinD1过表达的病例未检测至JCCND1扩增。实验结果提示CCND1基因扩增在中NSCLC较为常见,是引起CyclinD1过表达的原因之一,可能与NSCLC发病机制有关。4.本研究回访率51.2%,中位生存期为24个月。采用Cox比例风险回归模型评估各因素。单因素分析发现患者年龄、肿瘤大小、分化程度、组织类型CyclinD1表达以及转移与患者死亡率相关,是有意义的预后因素。多因素分析则仅发现p16表达、肿瘤大小和有无转移是独立的预后指标。P16、CyclinD1和Rb联合检测对NSCLC进展及预后的评估有一定的临床价值。结论：p16-cyclinD-pRB通路异常与NSCLC发病机制密切相关。启动子区5’CpG岛甲基化是NSCLC中p16基因失活的主要方式。CCND1基因扩增在NSCLC中较为常见,是引起cyclinD1过表达的原因之一,可能与NSCLC发病机制有关。P16、肿瘤大小和有无转移是判断NSCLC患者预后的有用指标。