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水稻茎秆的机械强度是水稻育种中最重要的性状之一,其机械强度主要取决于细胞壁的结构与成分。细胞壁在植物的物质运输、信号传递、机械支撑以及防卫反应等方面发挥重要作用。加深对水稻细胞壁突变体的研究,不仅有助于揭示水稻茎秆机械强度的调控机制,还可帮助阐明细胞壁作为天然屏障参与植物免疫反应的分子机制。
本文对水稻粳稻材料Sub1进行了EMS诱变处理,获得一份脆性感病突变体bc-sub1。对该脆性突变体的农艺性状、突变位点、稻瘟病菌抗病性进行了分析,获得了以下主要研究结果:
1.该突变体的脆性表型从苗期开始显现,伴随水稻整个生育期。
2.农艺性状调查分析表明,突变体bc-sub1的叶片、茎秆、颖壳等组织器官均表现脆性,茎秆机械强度明显下降,而株高、结实率、千粒重、有效穗数等其它农艺性状与野生型Sub1相比没有明显差异。
3.对突变体bc-sub1进行遗传分析,发现该性状受一对隐性核基因控制。利用F2分离群体中的隐性单株对突变体bc-sub1进行定位,初步将该基因定位于10号染色体分子标记RM258和RM25486之间。进一步扩大F2分离群体用于精细定位,最终将候选基因定位于标记Indel3和Indel22之间,物理距离为66.82kb。该区间共有10个候选基因,6个基因具有功能注释,这6个具有功能注释的基因中,LOC_Os10g32980编码OSCESA7-纤维素合酶,LOC_Os10g32990编码假定的类受体蛋白激酶2前体,LOC_Os10g33000和LOC_Os10g33010编码假定未分类的逆转座子蛋白,LOC_Os10g33040编码假定的类受体蛋白激酶前体,LOC_Os10g33060编码假定的hcr2-5D蛋白。
4.为鉴定发生隐性突变的基因,从野生型Sub1、突变体bc-sub1以及7个交换单株中,分别克隆并测序分析了具有功能注释的基因LOC_Os10g32980,发现在突变体bc-sub1中,编码纤维素合成酶亚基的基因LOC_Os10g32980/OsCesA7第九外显子第3661位碱基发生突变,由C颠换为T,该碱基突变导致编码蛋白的第847位氨基酸由亮氨酸(Leu)变成了苯丙氨酸(Phe)。因此初步确定LOC_Os10g32980为bc-sub1突变体的目的基因。
5.稻瘟病接种实验表明,突变体bc-sub1对稻瘟病菌株ZB15、ZB13、ZB9的抗性较野生型略有减弱,这说明OsCesA7基因影响水稻对稻瘟病菌的抗性。
6.对病程相关基因(PR基因)的表达量进行RT-PCR检测,发现bc-sub1突变体中病程相关基因(PR基因)Os04g10010、OsKS4的表达量明显低于野生型Sub1。使用flg22和chitin处理水稻,以诱导PR基因表达,在此条件下,发现bc-sub1突变体中PR基因的诱导表达程度明显低于野生型Sub1,这说明OsCesA7基因在水稻的抗病免疫应答反应中发挥重要功能。
本文对水稻粳稻材料Sub1进行了EMS诱变处理,获得一份脆性感病突变体bc-sub1。对该脆性突变体的农艺性状、突变位点、稻瘟病菌抗病性进行了分析,获得了以下主要研究结果:
1.该突变体的脆性表型从苗期开始显现,伴随水稻整个生育期。
2.农艺性状调查分析表明,突变体bc-sub1的叶片、茎秆、颖壳等组织器官均表现脆性,茎秆机械强度明显下降,而株高、结实率、千粒重、有效穗数等其它农艺性状与野生型Sub1相比没有明显差异。
3.对突变体bc-sub1进行遗传分析,发现该性状受一对隐性核基因控制。利用F2分离群体中的隐性单株对突变体bc-sub1进行定位,初步将该基因定位于10号染色体分子标记RM258和RM25486之间。进一步扩大F2分离群体用于精细定位,最终将候选基因定位于标记Indel3和Indel22之间,物理距离为66.82kb。该区间共有10个候选基因,6个基因具有功能注释,这6个具有功能注释的基因中,LOC_Os10g32980编码OSCESA7-纤维素合酶,LOC_Os10g32990编码假定的类受体蛋白激酶2前体,LOC_Os10g33000和LOC_Os10g33010编码假定未分类的逆转座子蛋白,LOC_Os10g33040编码假定的类受体蛋白激酶前体,LOC_Os10g33060编码假定的hcr2-5D蛋白。
4.为鉴定发生隐性突变的基因,从野生型Sub1、突变体bc-sub1以及7个交换单株中,分别克隆并测序分析了具有功能注释的基因LOC_Os10g32980,发现在突变体bc-sub1中,编码纤维素合成酶亚基的基因LOC_Os10g32980/OsCesA7第九外显子第3661位碱基发生突变,由C颠换为T,该碱基突变导致编码蛋白的第847位氨基酸由亮氨酸(Leu)变成了苯丙氨酸(Phe)。因此初步确定LOC_Os10g32980为bc-sub1突变体的目的基因。
5.稻瘟病接种实验表明,突变体bc-sub1对稻瘟病菌株ZB15、ZB13、ZB9的抗性较野生型略有减弱,这说明OsCesA7基因影响水稻对稻瘟病菌的抗性。
6.对病程相关基因(PR基因)的表达量进行RT-PCR检测,发现bc-sub1突变体中病程相关基因(PR基因)Os04g10010、OsKS4的表达量明显低于野生型Sub1。使用flg22和chitin处理水稻,以诱导PR基因表达,在此条件下,发现bc-sub1突变体中PR基因的诱导表达程度明显低于野生型Sub1,这说明OsCesA7基因在水稻的抗病免疫应答反应中发挥重要功能。