两种水稻主要病原细菌噬菌体的分离、鉴定和特征化研究

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水稻细菌性褐条病(Bacterial stripe of rice)及水稻白叶枯病(Bacterial blight of rice)是水稻上两种重要的细菌性病害,广泛分布于国内外各水稻种植区,已造成不同程度的水稻减产及经济损失。目前国内外对水稻细菌性病害的防控主要依赖于各种不同的杀菌剂,但过量使用化学杀菌剂容易污染环境,危害公众健康;而生防制剂效果易受环境条件的影响,亟待研究开发新的高效、经济、对生态环境相对安全的策略控制水稻褐条病和白叶枯病。噬菌体作为一种细菌病毒,能对宿主菌进行特异性裂解,加之噬菌体治疗具有使用剂量小、环境无毒、疗效快等优点,使得利用噬菌体生物防治水稻褐条病和白叶枯病成为可能。本研究收集了2013-2015年期间我国广东、浙江、吉林、黑龙江、辽宁等地约560份疑似水稻褐条病及水稻白叶枯病的样品,通过经典的植物致病细菌分离鉴定方法,最终获得27株水稻褐条病菌和23株水稻白叶枯病菌。在获得宿主菌的基础上,利用双层琼脂平板法筛选噬菌体,在获得大量两种病菌噬菌体的基础上,对1株水稻褐条病菌典型噬菌体和4株水稻白叶枯病菌典型噬菌体开展了电镜形态观察、单斑法测定宿主谱、双平板法测定效价、酶解法分析核酸及最佳感染复数和一步生长曲线的测定等研究,结果表明:这些噬菌体均有较高的效价(108-9 pfu/ml)和一非收缩性长尾及ds DNA;其中白叶枯病菌噬菌体宿主谱相对较广,褐条病菌噬菌体潜伏期较短。本研究为明确噬菌体裂解宿主菌的机制,还以水稻褐条病菌为对象,从宿主菌的形态、游动性、EPS生成量、生物膜变化等方面分析了噬菌体对水稻褐条病菌的影响,并通过受体类型分析,初步明确其受体类型为脂多糖,结合褐条病菌基因组分析和同源重组敲基因的方法构建与脂多糖合成相关的RlpB敲除突变体,结果表明:突变体菌株与野生型菌株相比,噬菌体对其吸附能力明显减弱,初步推测RlpB基因在噬菌体与宿主菌特异性吸附过程中发挥重要作用,有助于深入理解噬菌体与水稻褐条病菌的互作机制。最后,本研究利用剪叶、浸种接种病原菌的方法测定了噬菌体的生防效果及最佳防治方式,结果表明:噬菌体在病害感染初期应用有较好的防治效果,为日后的田间应用奠定了一定的基础。
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