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Toll-like受体识别病原相关的分子模式，主要在调控天然免疫中发挥作用。在肝脏中Toll-like受体激活炎症信号通路如NF-κB，JNK，p38和干扰素信号通路，并且起着调控抗病毒、抗细菌应答，病毒感染和伤口愈合的作用。
本文主要针对Toll-like信号途径相关蛋白筛选人类肝脏cDNA文库所得到的新的蛋白质相互作用进行进一步的验证。这一对待验证的相互作用对为：LBP和PRDX4。
工作主要包括以下内容：
(1)将编码LBP，PRDX4的基因分别克隆到载体pCDNA3.1-Myc-gfp上，并同时将编码LBP，PRDX4的基因克隆到载体pCDNA3.1-Flag-gfp。
(2)将该对需要验证的蛋白的编码基因分别克隆到带GST标签或着带His标签的大肠杆菌表达载体pET23a中。重组质粒转化BL21(DE3)，分别接种单菌落培养，并在IPTG诱导下表达，纯化该对蛋白。
(3)将编码LBP的基因，编码PRDX4的基因分别克隆到载体plEx-BacTM上。重组质粒pIEx-His-LBP和pIEx- His-PRDX4分别转染sf9细胞，并通过免疫印记检测2种蛋白的表达。
(4)表达质粒pCDNA3.1-Flag-LBP，pCDNA3.1-Myc-PRDX4，pCDNA3.1-Myc-LBP，pCDNA3.1-Flag-PRDX4分别转染HEK293细胞，并通过免疫印记检测其表达。免疫印记结果显示这些蛋白都能在HEK293细胞中表达。
(5)通过免疫共沉淀验证LBP和PRDX4之间的互作，结果显示这一对蛋白能互作。
(6)pulldown验证LBP和PRDX4的互作。
(7)利用免疫荧光检测LBP和PRDX4在细胞中的定位。结果显示PRDX4定位于细胞质中，而LBP定位于细胞质或细胞膜上。