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兰科(Orchidaceae)是被子植物的大科之一,其中许多种类具有很高的观赏和药用价值。近年来由于过度采集和环境破坏,导致许多兰科植物都处于濒危状态。在自然条件下,兰科植物种子需要与特定的真菌共生才能顺利萌发。因此了解兰科植物的共生真菌,是兰科植物保护工作的重要环节。本研究利用种子原地共生萌发技术(Insitu seed baiting technique)及种子迁地共生萌发技术(Exsitu seed baiting technique)分别成功获得了西双版纳地区2种和6种附生兰科植物的原球茎。经分离、鉴定原球茎内共生真菌,以及进行培养基共生萌发实验,从而筛选出对兰科植物种子萌发阶段有效的共生真菌。具体结果如下: (1)将兜唇石斛、景洪石斛、流苏石斛和多花脆兰的种子袋放置在长有相应兰科植物的生境进行原地共生萌发实验。在10个月后回收的种子袋中获得了兜唇石斛和景洪石斛萌发形成的原球茎及幼苗。 (2)在种子原地共生萌发实验中,从兜唇石斛种子袋放置的7个研究点中的4个研究点回收到的种子袋中获得了兜唇石斛种子萌发形成的原球茎及幼苗,并从其中3个研究点内的原球茎中成功分离得到9株菌株。结合菌株形态和分子鉴定证明所获得的真菌为同一种胶膜菌属(Tulasenlla,编号FDaI7)真菌和一种木霉属(Trichoderma,编号FDaI2)真菌。 (3)兜唇石斛种子与真菌培养基共生萌发结果表明,所分离得到的FDaI7菌株(胶膜菌属)能有效促进兜唇石斛种子萌发、原球茎发育以及幼苗的初期生长。一种从硬叶兰原球茎中分离到的FCb4菌株(胶膜菌属,Tulasenlla)虽能在有光照条件下有效促进种子萌发形成原球茎,但原球茎无法继续生长发育。而从兜唇石斛原球茎中分离到的FDaI2菌株(木霉属)对兜唇石斛种子萌发阶段无促进作用。种子在不同光照条件下的萌发结果表明,有无光照对兜唇石斛种子萌发并无影响。但在接种FDaI7菌株的实验组中只有在有光照条件下幼苗才能发育达到阶段5,说明兜唇石斛在幼苗发育阶段需要光照。 (4)利用迁地共生萌发技术,成功的获得了兜唇石斛、流苏石斛、鼓槌石斛、硬叶兰、多花脆兰和风蝶兰的原球茎。 (5)经种子迁地共生萌发培养,成功的获得了硬叶兰处于不同阶段的萌发种子、原球茎和幼苗。并从原球茎中分离得到7株菌株。结合菌株形态和分子鉴定证明所获得的真菌均为同一种胶膜菌属(Tulasenlla,编号为FCb4)真菌。 (6)硬叶兰种子与真菌培养基共生萌发结果表明,所分离得到的FCb4菌株(胶膜菌属)和从兜唇石斛分离到的一种胶膜菌属真菌FDaI7菌株均能有效促进硬叶兰种子萌发。虽然两种接菌处理在相同光照条件下的种子萌发率并无显著性差异。但在有光照条件下,接种FCb4菌株处理中达到幼苗阶段种子的比率显著高于接种FDaI7菌株的实验组,表明硬叶兰在种子萌发阶段在属的水平上与真菌专一性不强;而在原球茎发育及幼苗发育初期阶段在物种的水平上与真菌具有一定专一性。种子在不同光照条件下的萌发结果表明黑暗条件更有利于硬叶兰种子萌发与形成原球茎,但在黑暗条件下,当种子萌发形成原球茎后,表现出生长停滞的趋势,说明原球茎发育后期与幼苗发育阶段需要光照。