本研究首先通过小鼠游泳耐力试验和血液生化指标的测定对40余种昆虫、菌藻的抗疲劳作用进行了筛选；在此基础上，应用正交设计方法对以L-肉碱、二十八醇、牛磺酸和本实验筛选出的抗疲劳功效较好的昆虫A为原料的配方进行了抗疲劳作用筛选，并对筛选出的最佳配方，即抗疲劳复方添加剂1号配方进行了小鼠急性经口毒性试验、30天喂养试验和抗疲劳作用机理研究。结果表明：（1）蚂蚁、昆虫A、雄蚕蛾、蜂花粉、蚕蛹、香菇、银耳、猴头、双歧杆菌、乳酸杆菌均能显著延长小鼠游泳时间，降低血乳酸和血清尿素氮含量（P＜0.01或P＜0.05）。根据《保健食品功能学评价程序与方法》中的有关规定，可以认为以上10种昆虫、菌藻具有抗疲劳作用。（2）通过正交试验得到4个较优配方，4个配方均能显著延长小鼠游泳时间，降低血乳酸和血清尿素氮含量（P＜0.01或P＜0.05）。根据《保健食品功能学评价程序与方法》中的有关规定，可以认为这4个配方具有抗疲劳作用。（3）给小鼠灌胃抗疲劳复方添加剂1号方剂0.3ml／只（每ml相当于该方剂有效成分1g，小鼠平均体重为20g），在给药后1周的观察期中，除给药后4h内小鼠睡眠时间延长外，其它方面如饮食、精神活动等未见异常，也未见小鼠死亡。因此，该方剂对小鼠的LD₅₀＞15g／kg体重，根据《食品安全性毒理学评价程序》中的化学品急性毒性分级标准，属于无毒级。（4）将抗疲劳复方添加剂1号方剂以10％的比例添加到饲料中喂养小鼠一个月，喂养期间小鼠饮食、睡眠、精神活动正常。喂养结束后进行解剖学观察，未见肝、肾、胃、肠、心脏、肺脏有肉眼可见的病理学变化。肝、肾、胃、肠、大脑五种组织的显微结构清晰，未发现充血、淤血、细胞萎缩、变性、坏死、炎性细胞浸润和纤维组织增生等病理改变。肝、肾皮质的电镜切片观察结果表明，两种组织的细胞形态正常，细胞质着色均匀，细胞核大小匀称，核仁核膜清晰完整；细胞器结构清晰，线粒体完整，膜、脊、基粒清晰可见，基质均匀，电子密度适中；粗面内质网呈线状，其上有大量核糖体附着。有关生化指标与对照组相比均无显著性差异，表明肝脏、肾脏的功能正常。因此，1号方剂对主要脏器的结构和功能无不良影响，其亚慢性毒性很低。（5）该添加剂能显著提高小鼠的胸腺指数（P<0 .05）和脾脏指数（P<0.01）;增强500、GSH一Px的活性，降低血清MDA含量（P<0.01或P<0.05）:增强LDH活性，降低运动后血乳酸和血清尿素氮含量 （P<0.01）;增加静息对的糖原储备和运动后90min时的糖原含量（P<0.05）。以上结果提示提高机体的抗氧化能力、影响能量物质的贮备和动员、减少代谢产物的积累是该添加剂抗疲劳作用的主要机理:该添加剂还可能通过增强机体免疫机能发挥其抗疲劳作用。