冷阱聚焦结合SPME-GC/MS用于胸腔积液中肺癌标志物的分析研究

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肺癌(Lung Cancer,LC)是世界上严重威胁人们健康和生命的恶性肿瘤之一,在我国已跃居癌症死因第一位。肺癌标志物在肺癌诊断中已有了一定的临床应用价值,但灵敏度和特异性不高,常常出现误诊、漏诊的情况,且研究对象多为呼吸气、血液、尿液和细胞组织等样本。胸腔积液一般由肺部病变直接产生,与肺部疾病的发生关系密切,分为恶性和良性胸腔积液。肺癌是常见的引起恶性胸腔积液的病因,恶性胸腔积液的鉴别诊断对肺癌患者的早期治疗十分重要。研究表明,胸腔积液中含有许多挥发性有机物(Volatile Organic Compounds,VOCs),其存在与否与含量多少是人体健康状况的重要信息,可能与疾病发展有关。有报道认为,存在于呼气、血液、尿液等体液中的挥发性有机物可能是潜在的肺癌标志物,故对此类物质的分析具有重要意义。前期研究工作表明,胸腔积液中低沸点的挥发性有机物采用常规的SPME-GC/MS会造成谱带展宽,分离困难。因此本文首先建立了冷阱聚焦结合固相微萃取-气相色谱/质谱联用(SPME-GC/MS)的方法,用于胸腔积液中挥发性有机物的分析研究。自制了冷阱聚焦装置,进一步完善了实验条件,成功分离出数十种低沸点有机物。考察了方法重现性,得到各物质的RSD为1.35%13.37%。然后,对50例胸腔积液(20例恶性和30例良性)样品进行了检测分析。通过质谱NIST谱库检索结合人工解析,共鉴定出76个匹配度较高的VOCs,主要为烷烯烃类、醛酮等含氧有机物和苯系衍生物。其中24个物质的检出频率较高,在恶性或良性组的50%以上。基于这24个物质的选择离子峰面积,比较了它们在良恶性组间的差异,筛选出在恶性组中峰面积明显大于良性组(Rm/b>2.5)的6个挥发性有机物。此外,样品的收集历时数月,测定绝对峰面积会受仪器灵敏度的影响。因此在胸腔积液中加入内标物,分析了26例胸腔积液样品(10例肺癌和16例良性疾病患者)。定性得到检出频率在40%以上的27种挥发性有机物。考察了内标物的种类及浓度,最终以0.2 mg/L环戊酮为内标。基于27个物质的相对峰面积,初步比较了其在肺癌和良性组中的平均值,并进一步做箱形图分析来筛选差异性有机物。结果表明,2-戊酮、乙苯、二甲苯、环己醇、环己酮、2-乙基-1-己醇和四甲苯这7个有机物在肺癌和良性组间有较大差异。以上结果表明,本文开发的自制冷阱聚焦结合SPME-GC/MS方法适于胸腔积液中挥发性有机物的分析研究,结果为肺癌潜在标志物的筛选提供了参考。
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