糖尿病（diabetes mellitus,DM）是一种常见的以慢性血糖升高为主要特点的代谢紊乱性疾病。随着研究的深入，不断有新的发现对其发病机制进行完善与补充。传统观点认为，胰岛素缺乏和/或功能障碍是糖尿病的主要发病机制。近年来，胰高血糖素（glucagon，Glc）作为一种由胰岛α细胞分泌的升糖激素，在糖尿病的发生发展中的作用越发引起人们的重视。研究发现，自糖耐量异常起就可以出现血中胰高血糖素水平升高的现象。无论在1型还是2型糖尿病患者均存在基础或餐后胰高血糖素异常分泌的现象，导致肝糖输出增多，是造成糖尿病患者血糖升高的重要因素。研究发现糖尿病患者胰岛α细胞对高血糖的刺激反应性下降，高血糖时不能有效抑制胰高血糖素的分泌，提示高糖对胰岛α细胞具有糖毒性。NF-κB(nuclearfactor-kappa b,NF-κB)是细胞内的转录因子，作为高血糖的主要作用靶点，其激活可以促进TNF-α（肿瘤坏死因子-α）、IL-1β（白细胞介素-1β）、IL-6（白细胞介素-6）等多种炎症因子的表达，造成细胞的损伤和凋亡。另有研究发现，活化的NF-κB可以增加诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达，升高NO的水平，减弱高血糖对胰高血糖素分泌的抑制作用，是导致糖尿病胰高血糖素升高的原因之一。中医理论认为，糖尿病与“脾”（包含胰腺概念）的运化失调相关。津力达颗粒以从“脾”论治为理论基础，以人参、地黄、黄连和葛根为主要成分，从益脾气、滋脾阴、温脾阳等多方面发挥健脾功效，旨在从整体角度改善胰岛功能。既往研究证实，津力达颗粒可以有效改善胰岛β细胞的功能，因此，本研究将重点从胰岛α细胞的角度探讨其对胰腺保护作用的机制。本研究将通过用不同剂量津力达颗粒、津力达+通心络、二甲双胍、沙格列汀干预糖尿病大鼠，重点观察津力达颗粒对糖尿病大鼠胰高血糖素的作用。通过对胰腺组织HE染色、胰高血糖素免疫组化染色观察其对胰岛α细胞的影响。通过检测胰腺组织内炎症因子水平探讨其保护胰岛细胞的可能机制。实验共分两部分，第一部分，观察津力达颗粒对1型糖尿病大鼠血糖、胰高血糖素、胰高血糖素样肽-1的影响，并通过胰腺HE染色以胰高血糖素免疫组化染色观察其对胰腺细胞的保护作用。第二部分，通过检测胰腺组织中NF-κB mRNA及炎症因子的水平探讨津力达颗粒对胰岛细胞保护作用的可能机制。研究目的：本研究拟通过观察不同剂量津力达颗粒对糖尿病大鼠胰高血糖素的作用及对胰腺组织NF-κB、炎症因子的影响，探讨其对胰岛α细胞功能的影响及可能的机制，以进一步明确津力达颗粒治疗作用的理论依据。研究方法：Sprague-Dawley (SD)大鼠，腹腔注射STZ（60mg/kg）制备糖尿病大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组，糖尿病组再随机分为：糖尿病模型组、津力达低剂量治疗组、津力达中剂量治疗组、津力达中剂量+通心络治疗组、津力达高剂量治疗组、二甲双胍治疗组、沙格列汀治疗组，每组各8只，连续灌胃8周。第一部分：各组给药后监测血糖及体重，治疗8周结束，取腹主动脉血检测空腹血糖，放射免疫分析法检测空腹C肽，用酶联免疫分析法检测：糖化血红蛋白、空腹胰高血糖素、空腹胰高血糖素样肽-1；并取胰腺组织行HE染色和胰高血糖素免疫组化染色对比观察。第二部分：用实时荧光定量PCR检测胰腺组织中胰高血糖素mRNA、NF-κB mRNA、I-κB mRNA，酶联免疫分析法检测：肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）的水平。结果：1．大鼠一般情况：糖尿病大鼠模型诱导成功后，模型组大鼠血糖升高，出现明显多食、多饮、多尿的现象，精神萎靡，活动减少，毛色无光，体重增长缓慢。正常对照组大鼠一般状况好，毛发光整，有光泽，摄食、饮水、二便无明显异常，体重增长快。而不同药物干预组间糖尿病大鼠的表现有程度不等的改善。2．血液学指标：与正常对照组比较，糖尿病模型组空腹血糖、糖化血红蛋白、胰高血糖素显著升高（P<0.01），C肽、GLP-1水平显著下降（P<0.01）。与模型组FBG相比，津力达+通心络组、二甲双胍组降低（P<0.05）；与模型组C肽相比，津力达+通心络组、二甲双胍组水平升高（P<0.05）；与模型组HbA1c相比，津力达中剂量组、津力达+通心络组、津力达高剂量组、二甲双胍组水平降低（P<0.01）；与模型组胰高血糖素相比，津力达低剂量、中剂量、高剂量、津力达+通心络组、二甲双胍组、沙格列汀组水平均下降（P<0.01）；与模型组胰高血糖素样肽-1相比，津力达低剂量、中剂量、高剂量、津力达+通心络组、二甲双胍组、沙格列汀组水平均升高（P<0.05）。3．胰腺组织HE染色对比各组大鼠胰岛形态：正常对照组大鼠胰腺组织镜下显示，胰岛数量丰富，多为圆形或椭圆形的细胞团，界限清楚，大小不一，细胞形态完整，胞浆丰富，胞核圆形深染，位置居中。糖尿病模型组大鼠胰岛数量明显减少，体积明显萎缩，形态不规则，界限不清，胰岛细胞肿胀变大，胞质内空泡增多，着色变浅，细胞核固缩，偏心分布，部分缺失。与糖尿病模型组相比，低剂量津力达组、中剂量津力达组、津力达+通心络组、沙格列汀组胰岛数目、大小、形态均有一定改善，高剂量津力达组及二甲双胍组改善明显。4．免疫组化结果显示：正常对照组胰岛α细胞显示主要分布在胰岛周边部位；模型组α细胞与正常对照组相比有增多趋势；不同药物干预组胰高血糖素染色阳性细胞与糖尿病模型组相比下降不明显。与正常对照组相比，模型组胰高血糖素染色阳性细胞面积呈上升趋势；不同药物干预组与模型组相比，阳性细胞面积呈下降趋势，但均无统计学差异。5．RT-PCR检测各组大鼠胰腺组织基因表达结果：与正常对照组相比，糖尿病模型组胰高血糖素mRNA的表达升高（P<0.01），NF-κB mRNA表达升高（P<0.01），I-κB mRNA表达升高（P<0.01）；与糖尿病模型组相比，低剂量津力达组、中剂量津力达组、高剂量津力达组、津力达+通心络组、二甲双胍组、沙格列汀组胰高血糖素mRNA、NF-κB mRNA和I-κB mRNA的表达均下降（P<0.05）。6.酶联免疫分析法（ELISA）结果：与正常对照组相比，糖尿病模型组TNF-a、IL-1β、IL-6水平均升高（P<0.01）；与糖尿病模型组相比，低剂量津力达组、中剂量津力达组、高剂量津力达组、津力达+通心络组、二甲双胍组、沙格列汀组IL-1β、IL-6水平均下降（P<0.05），中剂量津力达组、高剂量津力达组、津力达+通心络组、二甲双胍组、沙格列汀组TNF-a水平下降（P<0.05）。结论：津力达颗粒可以有效降低糖尿病大鼠胰高血糖素水平，可能是通过减轻胰腺组织内炎症因子水平来起到改善胰岛α细胞功能的作用。