在许多生理和病理过程中,脂肪组织对能量代谢的调控起着很重要的作用,并可引发肥胖、心血管疾病和II型糖尿病等相关疾病。其中脂肪细胞分化得调控尤为重要。转录事件的级联在脂肪细胞分化过程中起着关键作用,其中有转录因子PPARs,C/EBPs和RXRs等的参与,它们通过直接或者间接地调控成熟脂肪细胞发育必需基因的表达,如LPL、SCD、GPDH、Glut4和PEPCK等来发挥作用。在分子水平上,激素和营养信号对反式作用因子的影响表明了脂质和脂质相关化合物与保持糖和脂质平衡重要基因之间存在联系。维生素作为营养和激素类物质,在脂质氧化和脂肪细胞增殖分化调控中起到重要作用。但是,其对脂肪细胞分化调控机制尚不是很清楚。研究维生素C、D3和9顺式维甲酸对脂肪细胞增殖和分化转录事件的调控作用有助于深刻了解与脂肪组织相关联的生理过程,从而为进一步调控猪体脂沉积提供理论依据,为肥胖和其相关并发症的治疗提供策略。本实验利用分离培养的原代猪前体脂肪细胞,利用细胞培养、油红O染色及提取法,半定量RT-PCR等细胞生物学和分子生物学技术,在体外较为系统地研究了维生素C、D3和9顺式维甲酸对猪脂肪细胞增殖和分化及分化过程中成熟脂肪细胞转录因子和脂肪形成相关基因转录时序表达的影响,探讨了维生素C、D3和9cisRA维生素类物质对猪脂肪细胞发育的调控机制。主要研究结果如下:1、利用SQRT-PCR法检测,RXRα肾脏组织中表达量最高,其次是肌肉和肝脏组织,再次是皮下脂肪组织、脾脏和肺,在心脏组织中表达量最低;2、维生素C以剂量和时间依赖的方式促进猪脂肪细胞的增殖分化。SQRT-PCR结果显示,250μmol/L Vit C通过上调转录因子PPARγ和RXRαmRNA的表达,促进脂肪形成相关基因LPL、SCD和PEPCK mRNA的表达,进而促进前体脂肪细胞的分化;3、维生素D3在1×10-4～1μmol/L的浓度范围内以剂量和时间依赖的方式抑制猪脂肪细胞的增殖和分化。SQRT-PCR结果显示,1μmol/L的VD3在分化第1和5天,显著抑制PPARγ和RXRαmRNA的表达(P<0.05),同时下调LPL、PEPCK、SCD、GPDH和Glut4 mRNA的表达。但在分化至第3和7天,因未添加维生素D3,这些基因的表达量虽上升,但不能恢复至正常水平;4、10μmol/L的9顺式维甲酸以时间依赖的方式抑制猪脂肪细胞的分化。联合1μmol/LVD3则使抑制作用加强。SQRT-PCR结果显示,10μmol/L 9顺式维甲酸显著下调PPARγ和RXRαmRNA的表达,同时也下调LPL、PEPCK、SCD、GPDH和Glut4 mRNA的表达。当在第5天不添加9顺式维甲酸,培养至第7天,检测到成熟脂肪细胞中转录因子的表达量上调,脂肪形成相关基因的表达也上升,但不会恢复至正常水平。但培养基中同时存在维生素D3时,分别培养至第1和5天,9顺式维甲酸的抑制效应得到增强,即明显降低转录因子PPARγ和RXRαmRNA的表达(P<0.05),抑制脂肪形成相关基因LPL、PEPCK、SCD、GPDH和Glut4 mRNA的表达。但当培养基中不存在维生素D3时,这些基因的表达量虽上升,但不能恢复至正常水平。