蓝靛果多糖提取纯化及其抗糖基化的功能评价

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以蓝靛果为原料,对蓝靛果多糖进行了提取、纯化研究,测定分子量和单糖组成,并研究了其对体外糖基化模型的抑制作用。利用正交试验的方法优化了热水浸提法和复合酶法提取蓝靛果多糖的提取工艺。热水浸提法的最佳提取条件为料液比为1:20g/mL,浸提时间3h,浸提温度50℃,多糖得率为21.53%(干重);复合酶法提取的最佳条件为复合酶添加量4%(果胶酶960U/g和纤维素酶800U/g),酶解温度60℃和酶解时间45min,此条件下的多糖得率为24.43%(干重)。采用响应曲面的方法对超声提取蓝靛果多糖的工艺进行了优化,得到的最佳条件为超声时间67min、浸提温度41℃、超声功率175W。在该条件下进行验证实验,所得结果为24.34%(干重)。确定超声辅助提取法为提取蓝靛果多糖的最佳方法。采用活性炭吸附法对多糖粗提液进行脱色,活性炭添加量为5%,脱色温度为75℃,脱色时间为60min,在此条件下,脱色率达98.1%,多糖保留率达到95%。采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析和Sephadex G-100葡聚糖凝柱胶层析对蓝靛果多糖进行分离纯化,得到一个单一对称峰,表明了蓝靛果多糖(LEP)为一个单一组分,回收率为59.67%。通过高效液相色谱法(HPLC)测定蓝靛果多糖组份的相对分子质量为8375Da;采用气相色谱法(GC)测定蓝靛果多糖的单糖组成为葡萄糖。建立体外非酶糖基化模型(BSA-葡萄糖模型)模拟反应体系,蓝靛果多糖做天然抑制剂,氨基胍为阳性对照组,蓝靛果多糖对果糖胺、乙二醛(GO)、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、类黑精、戊糖素和AGEs都有一定的抑制作用,且具有一定的剂量关系;通过SDS-PAGE电泳证实蓝靛果多糖在阻止糖与蛋白质交联上有一定作用。不同浓度的LEP对醛糖还原酶(AR)具有一定剂量效果的抑制作用。
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