牙鲆(Paralichthys olivaceus)，属鲽形目(Pleuronectiformes)、鲽亚目(Pleuronectoidei)、鲆科(Bothidae)、牙鲆属(Paralichthys)，是我国重要的海水经济鱼类之一。牙鲆在中、日、韩和俄等地区均有分布，其中我国主要分布在渤海、黄海、南海地区。牙鲆经济价值相对较高，但是由于环境、捕捞和工业化发展等多方面因素作用下，其渔获量逐步减少。随着社会经济的发展和市场需求量的增加，海水鱼类的养殖业在我国广阔的沿海地区发展迅速。然而，牙鲆的良种培育却一直跟不上养殖生产的节奏，整个牙鲆养殖产业缺乏优良的牙鲆养殖品种，严重阻碍了牙鲆养殖产业的发展。为此培育具有生长速度快、抗逆性强和品质高的牙鲆新品种，已迫在眉睫。本研究主要在牙鲆的良种选育方面进行了两方面的研究：一，利用静水压法，进行了牙鲆的卵裂雌核发育家系的建立，并在此基础上对近交家系和相关的雌核发育家系群体进行了遗传分析；二，进行了牙鲆F3代家系的建立及其遗传分析。通过对不同家系组合的遗传育种分析，旨在快速挑选出遗传力高、育种值高的优良亲本，并筛选出性状优良的杂交组合群体，为新的牙鲆优良品种的选育工作提供支持。另外在课题进行期间还进行了云纹石斑鱼、牙鲆等鱼类精子冷冻保存研究，以期为牙鲆卵裂雌核发育家系的建立提供技术支持。利用黄海水产研究所鱼类精子冷冻库冷冻保存的鲈鱼精子和2007年构建的优良家系为实验材料，进行了牙鲆卵裂雌核家系的诱导建立、胚胎发育观察、遗传倍性分析及遗传标记检测等相关研究。对卵裂雌核发育诱导结果表明：在水温为17℃条件下，在利用灭活鲈鱼精子受精后58min，以静水压力为590kg/cm2处理6min后，可获得较高的诱导成功率，可达到32.30±3.34%。牙鲆单倍体胚胎在原肠后期时，会出现典型的单倍体综合症性状，很难出膜或者出膜后很快死亡。卵裂雌核发育胚胎与正常二倍体胚胎发育无明显区别，其出膜后与正常仔鱼无异，能正常存活。利用流式细胞仪对三种胚胎进行检测表明：正常二倍体胚胎和卵裂雌核发育胚胎的DNA相对含量在27左右，单倍体的DNA相对含量在17左右，表明进过卵裂雌核发育诱导后，染色体加倍，为二倍体胚胎。对雌核发育家系跟近交家系的平均体重进行了对比，结果表明两者差异极为显著，在生长至6个月时，近交家系平均体重可达50g左右，而雌核发育家系仅仅为22g左右。利用筛选到多态性较高的30对微卫星引物对F0719近交家系跟相应卵裂雌核发育家系进行鉴定与分析，结果表明：30个微卫星位点在近交群体中均表现为杂合的多态基因，第1、2、15、16、19和21位点在卵裂雌核发育家系中表现为纯合的单态性。在其余位点利用卡方检验，均符合等位基因的1：1的遗传分离定律。通过POPGENE软件计算得到近交群体和雌核发育群体的遗传相似性达到0.8139，而其遗传距离为0.2059。利用来自18个家系的父母本，进行不完全双列杂交，构建51个F3代家系群体，使用QGA软件中的“加性-显性”模型对F3代群体的全长、体宽、体重、体长日增量、体重日增量五个性状进行遗传参数估计比较。根据对全长，体宽，体重，体重日增量进行成对比较所选择的家系中，1202、1226、1211、1206、1221和1219六个组合在四个性状中均表现优秀。而在加性效应分析中，KS、F0917、F0905号亲本在五个性状中均表现为极显著的正向效应，F09125号亲本在全长、体宽、全长日增重和体重日增重四个性状中表现为极显著的正向效应。F0751×F0915、F0751×F09125、KS×F0750、F0917×F09121、F0917×F09104五个杂交组合的显性效应在至少四个性状中均表现为极显著（P＜0.01）的正向作用。这些研究成果牙鲆家系的选种工作及下年的家系建立工作提供了指导，这为下一步牙鲆新品种的选育工作具有重要的意义。另外，为了辅助进行牙鲆家系建立过程中鱼类精子冷冻库的建立，本文利用云纹石斑鱼为研究材料，对鱼类精子冷冻保存技术进行了研究，研究内容包括对精子稀释液、抗冻剂种类和适宜浓度、冷冻保存液的筛选。结果表明，利用9g/LNaCl、10g/L KHCO3和10%小牛血清配制而成的稀释液EM1-2，利用“三步冷冻法”在60L液氮生物保存罐中用2ml冷冻管冷冻保存精子，解冻精子活力可达56.67±5.77%，要优于TS-2、ES1-3和其它EM系列稀释液冷冻保存精子活力。利用EM1-2为基础液配制抗冻保护剂，结果显示：10%~20%的DMSO和PG冷冻保存后精子活力无显著差异（P＞0.05），其中15%的DMSO和10%PG冷冻保存精子效果最优，解冻后精子活力可达54.52±7.81%和57.24±3.69%。利用冷冻保存1年的精液与云纹石斑鱼卵进行受精，受精率和孵化率均达到80%以上，与新鲜精子无显著性差异(P＞0.05)。本研究表明利用EM1-2配制15%的DMSO或10%的PG可以用于冷冻保存云纹石斑鱼精液。在此基础上建立了精子冷冻库，为牙鲆等鱼类的卵裂雌核发育家系建立和研究提供了基础支持。