疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)对蔬菜根结线虫寄生致死作用及应用研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:jettey
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通过对从山西不同地区设施蔬菜中采集的根结线虫罹病植株及根际土壤中所分离的线虫,采用常规形态学并结合分子生物学鉴定方法,鉴定和分析了山西根结线虫的种类及其优势种,并对从罹病线虫体上分离的1株寄生真菌X-16菌株的分类地位、代谢产物、寄生致死作用、生物学特性、发酵条件、菌剂研制和防治效果进行了比较系统的研究,主要研究结果如下:1.山西设施蔬菜根结线虫病的病原主要是南方根结线虫(Meloidogyne incognita)和北方根结线虫(Meloidogyne hapla)2种;南方根结线虫在全省平均虫口比例是82.6%,北方根结线虫是17.4%,南方根结线虫为山西设施蔬菜的优势种群。2.从所采集样本的罹病线虫中分离筛选出一株对根结线虫具有寄生作用的真菌,是疣孢漆斑菌Myrothecium verrucaria X-16菌株,室内测定该菌株对根结线虫具有明显的致死作用,处理浓度为5×108cfu·ml-1时,72h 2龄幼虫的校正死亡率为70.94%,LC50为7.7 ×108cfu·ml-1;在1%、2%、4%3种剂量下,对黄瓜根结线虫盆栽生防效果在52~61%之间。3.疣孢漆斑菌X-16菌株对黄瓜根结线虫卵、二龄幼虫和雌虫具有较强的寄生作用。寄生卵可导致卵壳皱缩凹陷,胚胎发育停止,卵内长满菌丝,第6d卵寄生率达67.15%;寄生根结线虫2龄幼虫,初期形成芽管侵入2龄幼虫,体表形成菌网,缠绕体壁,第13d寄生率达82.3%;寄生雌虫体壁形成致密菌网。4.疣孢漆斑菌代谢产物甲醇提取物对根结线虫具有较强的致死作用,浓度25mg/ml,72h二龄幼虫死亡率是96.50%,LC50是4.18mg/ml。采用反相柱层析方法,甲醇提取物中分离出9种流份,其中流分流份T2、T3、T6、T8均表现出较强的杀根结线虫活性,72h校正死亡率分别为65.75%、70.36%、79.29%、51.49%。5.采用GC-MS分析方法,从3种具有明显抑杀作用的流分中初步分离纯化出2种对根结线虫具有毒杀活性的化合物,即乙酸丁酯和六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮-3-二异丁酯。浓度是500μg/ml时,72h乙酸丁酯对根结线虫校正死亡率是51.2%,六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮-3-二异丁酯为64.8%。6.通过对疣孢漆斑菌X-16菌株生物学特性研究表明,菌株X-16生长最适碳氮比是20:1;最适碳源是可溶性淀粉;碳浓度1~2 mol· L-1时最有利于液体培养和平板产孢;最适氮源是无机氮源硝酸钠,有利于液体培养菌丝球的形成和产孢量增加;乳糖作为碳源、牛肉膏和硫酸铵作为氮源有利于菌株X-16孢子萌发;25℃~32℃范围内较适合分生孢子萌发;30~32℃适宜菌株X-16产孢;pH6.5~7.5适宜孢子萌发;pH 6.5适宜产孢;24h光照有利于产孢,环境较高湿度有利于孢子萌发。7.疣孢漆斑菌分生孢子固液两相发酵最佳条件是:培养基是大米培养基,液体培养时间60h;接种量12%;料水比是1:0.02~1:0.05;固体发酵温度是30℃~32℃;固体发酵中硝酸钠添加量是1%;固态发酵周期18d;菌剂干燥适宜温度是35℃,干燥时间是24h。8.疣孢漆斑菌可湿性粉剂研制中载体是硅藻土、润湿剂选择B-3、助悬剂选择D-82、崩悬剂选择D-3;该剂型田间防治中,对甜瓜根结线虫防治效果是53.7%,菌剂X-16丰富了土壤微生物菌落数量,其中增加土壤真菌7倍,增加土壤放线菌60倍,增加土壤细菌2倍。
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