【摘 要】
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布鲁氏菌病(Brucellosis)是当今世界上广为流行的人畜共患的慢性传染性疾病,在我国被列为二类传染病。该病由革兰氏阴性细菌布鲁氏菌属(Brucella)的病原菌感染而引起,人感染后呈现
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布鲁氏菌病(Brucellosis)是当今世界上广为流行的人畜共患的慢性传染性疾病,在我国被列为二类传染病。该病由革兰氏阴性细菌布鲁氏菌属(Brucella)的病原菌感染而引起,人感染后呈现波浪热以及关节痛和睾丸炎等临床症状,动物感染后会造成流产、不孕不育和组织坏死等严重的后果。近十多年来,牲畜感染布鲁氏菌病的数量不断增加,我国感染布鲁氏菌病的人数持续上升,布鲁氏菌病已经成为阻碍牧区经济发展的重要因素,严重威胁了人类健康。目前,在世界范围内,布鲁氏菌病还不能被完全治愈,所以,关于布鲁氏菌及布鲁氏菌病的研究和防治工作尤为重要,对布鲁氏菌病最主要的防控措施是接种疫苗。布鲁氏菌外膜蛋白(Omp)是可以引起保护性免疫反应的一种细菌表面蛋白,一直被视为关于布鲁氏菌研究的重点;细胞质结合蛋白被认为与布鲁氏菌的致病性相关,可诱导机体产生强烈的免疫反应。本文以布鲁氏菌细胞质结合蛋白基因P39和抗原表位基因(omp10、omp19、omp22、omp25、omp28)为研究对象,以猪型布鲁氏菌疫苗S2弱毒活疫苗菌株的全基因组DNA为模板,设计引物克隆目的基因,将得到的目的基因插入质粒载体中,成功构建重组质粒pET-28a-omp10、pET-28a-omp19、pGEX-4T-1-omp22、pET-28a-omp25、pET-28a-omp28和pGEX-4T-1-p39,经PCR检测和测序鉴定正确后,导入到表达菌株中,IPTG诱导表达蛋白,重组蛋白经聚丙烯酰胺变性凝胶电泳(SDS-PAGE)检测分析。实验结果表明,重组蛋白可以成功表达,Omp10、Omp19、Omp22、Omp25、Omp28、P39蛋白的分子量分别为38.5kD、17.6kD、47kD、53.5kD、52.5kD、39kD,与预期一致。将纯化后的蛋白与弗氏佐剂混合后免疫家兔,取血清后进行免疫血清的Western blot检测,结果显示,Omp22、P39蛋白刺激机体产生了相应的抗体,具有良好的免疫原性。本试验为进一步筛选的确有效的布鲁氏菌亚单位疫苗提供参考。
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