论文部分内容阅读
通过BLAST方法,我们从GenBank中获得了家猪面型干扰素PoIFN-?J,-入3的标准序列,并设计特异性引物,从猪肾细胞PK-15中调取了家猪千扰素PoIFN-、l,43的cDNA序列。使用软件进行序列分析,并通过构建不同物种的IFN-?^系统发生树,揭示了各亚型么间的进化关系。为了进一步分析PoIFN-人家族的性质,构建了pcDNA3.1/myc-战s(-)B/PoIFN-、s真核表达载体,并进行表达及性质研究。首先检测了在BHK-21细胞中转录及翻译水平的表达情况,发现R)IFN-化分别具有1个及2个N端-糖基化位点。其次,鉴定了PoIFN-Xs在猪肾细胞旧RS-2及PK-15细胞中对poly I:C、FMDV、PRV的应答表达谱。此外,检测了PoIFN-Xs在扭艮S-2中诱导抗病毒基因及细胞因子的表达情况,结果显示PoIFN-?^可显著诱导MX、OAS、PKR等ISGs及细胞因子正-6、TNF-a的表达。再者,抗病毒实验表明,PoIFN-?^s在PK-15/PRV及IBRS-2/FMDV系统均具有低于P〇IFN-al2的抗病毒活性。本研究测定了化IFN-、-0),-S家族在IBRS-2/FMDV,PK-15/PRV及Marc-145/PRRSV系统的抗病毒活性,结果显不各亚型具有不同强弱的抗病毒活性。其中,P〇IFN-(〇7具有高于PoIFN-al2的抗PRV与PRRSV能力。此外,较为系统地探索了它们分别与家猪I型干扰素家族成员PoIFN-al2联合使用的抗病毒叠加效果。在曲RS-2/FMDV系统中,将1U PoIFN-历S,Ss分别与1U PoIFN-al2联合使用,抗病毒活性増加10~200倍;不同效价比的PoIFN-?^/PoIFN-al2联合使用,体现出5~500倍不等的抗病毒增强作用;Real Time PCR检测发现IFN联合处理后的把民8-2细胞中ISGs表达量协同升高。在Marc-145细胞/PRRSV/SY0608病毒系统中,将PoIFN-?^,cos,Ss分别与等体积PoIFN-od2联合使用,采用CPE观测及Real Time PCR检测方法,观察到抗病毒能力的増强,其中IFN-col,-〇)2具有最佳协同效果。在PK-15细胞/PRV病毒系统中,除POIFN-X3与等效价PoIFN-al2联用时无明显变化,其他各等效价组合均体现出抗病毒能力的増强。