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目的:1.建立持续性角膜上皮缺损模型,观察不同时相的角膜上皮缺损对骨髓间充质干细胞增殖能力的影响。2.体外建立骨髓间充质干细胞迁移模型,观察迁移前后其在转分化(成脂分化)能力方面的变化。3.探讨迁移后的骨髓间充质干细胞在条件培养基诱导下向角膜上皮样细胞分化的能性。方法:1.选取健康雄性wistar大鼠40只,随机分为8组,分别命名为缺损组(A, B, C, D, E, F,G)和空白对照组。每天对缺损组大鼠左眼行角膜上皮刮除术,建立持续性角膜上皮缺损模型,在角膜上皮持续缺损的第2天处死缺损组A,持续缺损的第3天处死缺损组B,以此类推,在角膜上皮持续缺损的第8天处死缺损组G,并在无菌条件下获取各组骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测各组细胞周期。2.体外建立仿生理的骨髓间充质干细胞穿透脐静脉血管内皮细胞模型,通过倒置相差显微镜观察、流式细胞技术鉴定、成脂分化能力定量分析,进而探讨迁移前后骨髓间充质干细胞的转分化能力。3.迁移后的骨髓间充质干细胞在含角膜基质组织块及角膜上皮细胞上清液的条件培养基中共培养7d,免疫荧光法检测角蛋白CK12的表达。结果:1.细胞周期检测结果显示:B、D组S期细胞比例的均数分别为16.76%、17.95%,明显高于其他缺损组和对照组(P<0.05),B、D组G1期细胞比例的均数分别为72.26%、71.33%,低于其他缺损组和对照组(P<0.05);但尚不能认为B,D组S期细胞比例及G1期细胞比例的均数不同(P>0.05),也不能认为A、C、E、F、G及对照组间的S期细胞比例及G1期细胞比例的均数不同(P>0.05)。2.迁移前后骨髓间充质干细胞的形态有明显差异;迁移前后骨髓间充质干细胞均有成脂分化的能力,其定量分析结果显示:迁移前、后细胞的OD值均数分别为0.0971、0.1016,两者差异无统计学意义(P>0.05)。3.经迁移模型后的骨髓间充质干细胞在条件培养基中培养7d后,形态由长梭形逐渐变为多边形、三角形。免疫荧光法未检测到CK12的表达。结论:1.在本实验设计的持续性角膜上皮缺损模型中,持续缺损第3d和第5d的骨髓间充质干细胞的增殖能力明显提高。2.骨髓间充质干细胞在穿透脐静脉血管内皮细胞前后,均有成脂分化能力。3.经迁移模型后的骨髓间充质干细胞在条件培养基中培养7d后,形态学方面有变化,但是未表达角膜上皮细胞特异角蛋白CK12。