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Micro-Tom是微型矮化的番茄品种。与普通番茄相比,它植株矮小、种植密度高、生命周期短并且可以被高效地转化。这些优点使得Micro-Tom在植物功能基因组学研究方面具有重要作用并被广泛应用。本研究以Micro-Tom为试材,建立了高效再生体系和遗传转化体系,获得了转基因植株,并应用实时PCR技术对转基因材料进行了分子鉴定。主要研究结果如下。(1)建立了Micro-Tom番茄高效再生体系研究不同外植体类型及切割方式、激素配比、糖浓度等因素对不定芽或根再生的影响,建立一套高效稳定的组织培养再生体系。结果表明:子叶再生不定芽频率高于下胚轴;子叶外植体在培养基中的切割方式以横切为佳;2.0mg·L-1ZR和0.5mg·L-1IAA组合最适合诱导高频率的Micro-Tom番茄愈伤组织和再生植株;培养基中蔗糖浓度为20g·L-1时最有利于不定芽再生,0.2mg·L-1IBA最适合诱导新生根。(2)建立了Micro-Tom番茄遗传转化体系建立了一套基于Kan筛选的遗传转化体系。将切好的子叶在已稀释至OD600值为0.1的农杆菌菌液中浸泡10min,接种到不含抗生素的培养基中共培养2d;共培养后的外植体转移至Kan浓度为100mg·L-1的培养基中筛选;最终转化率平均为11.25%。同时也对潮霉素抗性筛选体系进行了初步研究,表明10 mg·L-1的潮霉素最适合用于筛选抗性芽。(3)建立了转基因检测体系以筛选标记基因NPTⅡ和植物内标基因CRTISO为检测对象,建立了转基因植物PCR检测体系。结果表明,所建立的PCR检测体系能有效地对抗性植株进行转基因检测。根据NPTⅡ和CRTISO基因实时PCR的Ct差值(△Ct),应用21+△Ct可判断基因插入与否。确立了用于实时PCR检测的最佳模板浓度范围。用煮沸法制备的模板DNA用于PCR扩增时稀释100-10000倍为佳。经提取纯化的模板DNA浓度在0.25-25ng·μL-1。为佳。