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腹泻是影响仔猪成活率的主要疾病之一,参考资料报道,因腹泻导致仔猪死亡占仔猪死亡总数的39.8%。目前,仔猪腹泻的防治主要使用抗生素,但耐药菌的产生、抗生素污染等问题已引起人们的高度重视。微生态制剂(又称益生菌制剂)在防治肠道疾病方面,不仅安全无害,无残留,不产生抗药性,还有提高饲料利用率,促进动物生长,改善产品品质等作用,是国内外研究的热点,但防效低和使用成本较高是推向实用的瓶颈。本研究旨在从仔猪肠道中筛选防治效果显著、制剂生产性能优良的益生菌菌株,并对其功能和生物学特性进行研究,为仔猪专用高效益生菌制剂的研制提供材料和技术支持。 对利于乳酸菌和致病性大肠杆菌共同生长培养基进行了筛选研究。以营养肉汤为基础培养基,对常用的7种营养因子进行了单因子筛选试验,明确了葡萄糖和吐温两种物质利于乳酸菌和致病性大肠杆菌的生长,在添加两种物质的肉汤培养基中,乳酸菌和致病性大肠杆菌的活菌数量均可达到1×108cfu/mL以上。采用L934正交试验,筛选出适合乳酸菌和致病性大肠杆菌生长的最佳培养基组合,其培养基配方为:牛肉膏0.9%、蛋白胨0.7%、吐温0.1%、葡萄糖1%。 采用平板倾注法,从来自不同地点、不同品种、不同日龄健康仔猪粪便中共分离获得128株乳酸菌。以致病性大肠杆菌K88、K99为防治靶标,初筛出具有较强抑菌活性的菌株25株;通过耐酸、耐胆盐、生长速率等生物学特性比较,确定编号为1-3的菌株的综合性能最佳。经鉴定1-3菌株是一株戊糖乳杆菌(L.pentosum)。该菌的生长温度为15~42℃,生长pH为4~9;最适生长温度37℃,最适生长pH为7。 进行了1-3活菌制剂防治仔猪腹泻的活体试验。以8头健康长白母猪所产的90头仔猪为试验材料,随机分组进行了腹泻预防试验,设空白为对照。研究结果为,1-3活菌制剂预防组的腹泻率为8.51%,对照组为78.57%,差别极显著(p<0.01)。对空白组出现腹泻的仔猪进行了治疗比较试验,庆大霉素为对照。结果,1-3制剂治疗组的总有效率为100%,治愈率76.47%,平均疗程5d;庆大霉素治疗组的有效率为93.75%,治愈率仅为31.25%,平均疗程6d,差别显著(P<0.05)。此外,与对照比较,1-3制剂预防组仔猪的精神状态好,毛色光亮,粪便成型;即使个别出现腹泻情况,连续灌服乳酸菌制剂两天(1次/天),即可痊愈。 初步探讨了1-3菌株的抑菌机理。对1-3菌株的MRS发酵液、发酵滤液、中和滤液进行了抑菌试验。结果,发酵液和发酵滤液的抑菌活性无显著差别,表明1-3菌株的抑菌物质为胞外代谢产物;中和滤液仍有抑菌活性,说明除乳酸外,还有其它非酸抑菌物质,具体类别和结构有待深入研究。发酵液经70℃、100℃、121℃处理20nin后仍有抑菌活性,说明抑菌物质具有耐热性。 进行了廉价增殖培养基的筛选试验。分别以价廉易得、周年供应期长的番茄和胡