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目的:特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一种慢性,进展性且致死性的间质性肺疾病,因发病机制不明缺乏有效的治疗措施。IPF的发病机制目前尚未完全明了,但是随着对该疾病的不断深入研究,目前认为反复肺上皮细胞损伤和肌成纤维细胞活化是导致肺纤维化发生的直接原因,在损伤修复过程中所产生的大量促纤维化的细胞因子通过自分泌或旁分泌的形式可诱导成纤维细胞发生分化、增殖、迁移甚至侵袭,造成细胞外基质的不断沉积,阻碍正常的损伤修复,最终导致肺结构的破坏和纤维化的发生。转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）在肺纤维化发生发展过程中起着中心调控的作用。TGF-β1及其下游的信号通路在IPF发病过程中的关键作用使之成为一个具有吸引力的治疗靶点。卵泡抑素样蛋白1（follistatin-like 1,Fstl1）是TGF-β1诱导产生的一种分泌型糖蛋白。课题组前期通过利用IPF病人的肺组织及细胞、博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型及Fstl1+/-小鼠模型研究发现Fstl1具有促纤维化作用,在成纤维细胞中Fstl1能通过促进TGF-β1/Smad2/3信号通路来调控肌成纤维细胞的活化及细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的聚积。并且利用Fstl1中和抗体22B6进一步证实了Fstl1在肺纤维化中的重要作用。TGF-β1能够通过调控其下游的Smad或非Smad（MAPK或Akt）信号通路,在肺纤维化发病过程的阶段起着重要的促进作用。课题组前期已研究证实了Fstl1通过TGF-β1/Smad2/3通路在肺纤维化中的重要作用,但非Smad信号通路是否也参与IPF的发病过程目前无人报道。基于此,本研究的目的是探讨相对于TGF-β1/Smad经典信号途径,Fstl1是否通过TGF-β1/MAPK非经典信号通路影响肺纤维化发生、发展的影响。方法:1.在体研究,在Fstl1+/-和野生型C57BL/6J小鼠中,气管内注入博来霉素建立小鼠肺纤维化模型;对照组气管内注入生理盐水。14天后,取肺组织,用HE染色及羟脯氨酸含量测定方法验证纤维化模型是否构建成功。用qRT-PCR和western blot的方法分别检测小鼠肺组织内Fstl1的mRNA和蛋白水平变化,以及MAPK信号通路磷酸化水平变化。从Fstl1+/-和野生型小鼠肺组织中分离原代肺成纤维细胞,对比两组MAPK信号通路磷酸化水平变化。2.体外研究,TGF-β1刺激Fstl1+/-和野生型肺成纤维细胞后,用western blot和细胞荧光免疫的方法观察肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化情况及Fstl1缺失对其分化的影响。通过western blot方法观察Fstl1+/-小鼠成纤维细胞和在野生型成纤维细胞中外源加入Fstl1蛋白后,MAPK信号通路磷酸化水平变化。在小鼠肺成纤维细胞系（MLg）中,分别加入ERK、p38及JNK的抑制剂U0126、SB202190及SP6001251小时后,加或不加TGF-β1及Fstl1蛋白刺激24小时,运用western blot、MTT法和Transwell小室分别观察MLg的分化、增殖、迁移和侵袭情况。结果:在体实验中,气管内注入博来霉素后,肺组织HE染色显示小鼠肺部胶原沉积在0、7、14d呈逐渐加重趋势,羟脯氨酸含量逐渐增加,肺纤维化模型制备成功。博来霉素处理后的肺组织中Fstl1的mRNA和蛋白水平随时间逐渐增加,并伴随MAPK信号通路的活化;Fstl1+/-抑制MAPK信号通路的激活。在细胞学实验中,TGF-β1刺激诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化及Fstl1生成,TGF-β1联合Fstl1促进MAPK信号通路的活化,Fstl1+/-不仅减轻肺成纤维细胞的分化还抑制MAPK信号通路的激活。p38、JNK的抑制剂能抑制MLg向肌成纤维细胞分化,并抑制MLg的增殖、迁移及侵袭能力,而ERK抑制剂对MLg的分化、增殖、迁移及侵袭能力无明显影响。结论:在肺纤维化中,Fstl1是一个促纤维化的细胞因子,并可能通过TGF-β1/p38/JNK信号通路影响肺成纤维细胞的分化、增殖、迁移和侵袭能力,从而影响肺纤维化的发生、发展。