论文部分内容阅读
[目的]研究四种人正常细胞系(SV-HUC、HBE、HTR-8、HaCat)脂氧合酶同工酶蛋白表达及诱导表达情况,并比较5-LOX与CYP1B1/2E1蛋白表达水平；同时探讨联苯胺(BZD)对其致癌主要的靶细胞人膀胱上皮细胞(SV-HUC)的氧化应激作用及5-LOX对其作用的影响；为LOX协同氧化外源性化学物及其损伤提供进一步的线索。[方法]①蛋白印迹法测定5-LOX.12-LOX.15-LOX-2、CYP1B1CYP2E1蛋白表达水平；②以SV-HUC细胞为氧化应激研究目标细胞,不同浓度BZD(50、100、200μmol)染毒SV-HUC细胞24h,采用荧光分光光度计测定细胞内ROS水平,分光光度计超氧歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和抗氧化剂(GSH)含量的变化,酶标仪检测细胞内丙二醛(MDA)的含量；同时测定5-LOX特异性抑制剂AA861对上述氧化应激指标的影响。[结果]①四种正常细胞中均有5-LOX、15-LOX-2的表达,苯并(a)芘、BZD可诱导5-LOX表达增加；SV-HUC细胞中5-LOX蛋白表达水平与CYP2E1相差不大,高于CYP1B1;在正常HBE、HaCat、HTR-8细胞中,5-LOX蛋白表达水平低于CYP1B1;②BZD可诱导SV-HUC细胞内ROS水平、CAT酶活力及MDA含量增加,BZD为100、200μmol/L时ROS和CAT活力显著增加(p<0.05),200μmol/L BZD时MDA增加具有统计学差异(p<0.05),细胞内SOD酶活力随着BZD浓度增加呈现先升高后降低的趋势(p<0.05),细胞内GSH含量随着毒物浓度升高而下降,BZD为200μmol/L时降低具有统计学意义(p<0.05)；预先使用不同浓度的抑制剂AA861的高浓度BZD组,AA861对上述氧化应激指标起到保护作用,以浓度为10μmol/L的AA861较好。[结论]5-LOX可能是上述四种人正常细胞系中协同氧化外源性化学物的主要的LOX同工酶；5-LOX抑制剂AA861对BZD所致其致癌作用主要靶细胞SV-HUC细胞氧化应激具有保护作用,提示BZD在该细胞中可能通过5-LOX代谢活化,导致氧化应激,可能与联苯胺致膀胱癌有关；AA861可以抑制BZD引起的氧化应激。图